Giardia duodenum হল একটি পরজীবী জীব যা giardiasis সৃষ্টি করে, একটি অন্ত্রের সংক্রমণ বিশেষ করে অল্পবয়সী শিশুদের মধ্যে ডায়রিয়ার ক্লিনিকাল লক্ষণ রয়েছে।আমরা পূর্বে রিপোর্ট করেছি যে এক্সট্রা সেলুলার জি ডুওডেনালিস ইন্ট্রাসেলুলার অলিগোমারাইজেশন-এর মতো রিসেপ্টর 3 (NLRP3) বাইন্ডিং নিউক্লিওটাইডগুলির সক্রিয়করণকে ট্রিগার করে এবং এক্সট্রা সেলুলার ভেসিকল (EV) ক্ষরণের মাধ্যমে হোস্ট প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে।যাইহোক, এই প্রক্রিয়ার সাথে জড়িত প্যাথোজেন-সম্পর্কিত ডুওডেনোকোকাল ইভি (জিইভি) এর সঠিক আণবিক নিদর্শন এবং জিয়ার্ডিয়াসিসে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোমের ভূমিকা ব্যাখ্যা করা বাকি রয়েছে।
GEV-তে রিকম্বিন্যান্ট ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-আলফা-2 এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিনগুলি তৈরি করা হয়েছিল, মাউসের প্রাথমিক পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে রূপান্তরিত হয়েছিল এবং প্রদাহ লক্ষ্য অণু ক্যাসপেস -1 পরিমাপ করে সনাক্ত করা হয়েছিল।p20 এক্সপ্রেশন স্তর স্ক্রীন করা হয়েছিল।.G. duodenalis alpha-2 এবং alpha-7.3 giardines মূলত NLRP3 inflammasome (NLRP3, pro-interleukin-1 beta [IL-1β], pro-caspase-1 এবং caspase-1 p20), IL ক্ষরণ পরিমাপের মাধ্যমে চিহ্নিত করা হয়েছিল।1β স্তর, অ্যাপোপটোটিক স্পটেড প্রোটিন (ASC) অলিগোমারাইজেশন স্তর এবং NLRP3 এবং ASC এর ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট স্থানীয়করণ।G. duodenalis-এর প্যাথোজেনিসিটিতে NLRP3 প্রদাহের ভূমিকা তারপরে ইঁদুর ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল যেখানে NLRP3 অ্যাক্টিভেশন ব্লক করা হয়েছিল (NLRP3 অবরুদ্ধ ইঁদুর) এবং শরীরের ওজন, ডুওডেনাল পরজীবী লোড এবং ডুওডেনাল টিস্যুতে রোগগত পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।উপরন্তু, আমরা তদন্ত করেছি যে হায়ার্ডাইন আলফা-২ এবং আলফা-৭.৩ ভিভোতে IL-1β নিঃসরণকে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোমের মাধ্যমে প্ররোচিত করে এবং ইঁদুরের জি. ডুওডেনালিসের প্যাথোজেনিসিটিতে এই অণুর ভূমিকা নির্ধারণ করে।
Alpha-2 এবং alpha-7.3 giardines ভিট্রোতে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয়করণকে প্ররোচিত করে।এটি p20 ক্যাসপেস-1 সক্রিয়করণের দিকে পরিচালিত করে, NLRP3, প্রো-IL-1β এবং প্রো-ক্যাসপেস-1 প্রোটিনের প্রকাশের মাত্রা বৃদ্ধি পায়, IL-1β নিঃসরণে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি, এএসএ দাগের গঠন। সাইটোপ্লাজম, এবং এএসএ অলিগোমারাইজেশনের আনয়ন।NLRP3 প্রদাহ পেনাইল ক্ষয় ইঁদুরের মধ্যে G. duodenalis-এর প্যাথোজেনিসিটি বাড়িয়ে দেয়।NLRP3-অবরুদ্ধ ইঁদুরের গ্যাভেজ দ্বারা সিস্টের সাথে চিকিত্সা করা ইঁদুরগুলিতে ট্রফোজয়েটের সংখ্যা বৃদ্ধি পেয়েছে এবং ডুওডেনাল ভিলির মারাত্মক ক্ষতি হয়েছে, যা সঙ্কুচিত এবং শাখাযুক্ত নেক্রোটিক ক্রিপ্ট দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছে।ভিভো পরীক্ষায় দেখা গেছে যে গিয়ারডিন আলফা-২ এবং আলফা-৭.৩ NLRP3 প্রদাহের মাধ্যমে IL-1β নিঃসরণ ঘটাতে পারে এবং giardines alpha-2 এবং alpha-7.3 এর সাথে ইমিউনাইজেশন ইঁদুরের মধ্যে G. duodenalis-এর প্যাথোজেনিসিটি কমিয়ে দেয়।
একত্রে নেওয়া, এই গবেষণার ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে গিয়ার্ডিয়া আলফা-2 এবং আলফা-7.3 হোস্ট NLRP3 প্রদাহকে উপেক্ষা করে এবং ইঁদুরের মধ্যে জি ডুওডেনালিসের সংক্রামকতা হ্রাস করে, যা গিয়ার্ডিয়াসিস প্রতিরোধের জন্য প্রতিশ্রুতিবদ্ধ লক্ষ্য।
Giardia duodenum হল একটি বহিঃকোষী প্রোটোজোয়ান পরজীবী যা ছোট অন্ত্রে বাস করে এবং প্রতি বছর ডায়রিয়া সহ 280 মিলিয়ন গিয়ার্ডিয়াসিসের ঘটনা ঘটায়, বিশেষ করে উন্নয়নশীল দেশগুলির ছোট শিশুদের মধ্যে [1]।মানুষ পানীয় জল বা M. duodenum সিস্ট দ্বারা দূষিত খাবার দ্বারা সংক্রামিত হয়, যা পরে পেটে প্রবেশ করে এবং গ্যাস্ট্রিক রসে নির্গত হয়।Giardia duodenum trophozoites duodenal epithelium এর সাথে সংযুক্ত থাকে, যার ফলে বমি বমি ভাব, বমি, ডায়রিয়া, পেটে ব্যথা এবং ওজন কমে যায়।ইমিউনোডেফিসিয়েন্সি এবং সিস্টিক ফাইব্রোসিস আক্রান্ত ব্যক্তিরা সংক্রমণের জন্য সংবেদনশীল।মৌখিক এবং পায়ূ যৌনতার মাধ্যমেও সংক্রমণ ঘটতে পারে [2]।মেট্রোনিডাজল, টিনিডাজল এবং নাইটাজক্সানাইডের মতো ওষুধগুলি ডুওডেনাল সংক্রমণের জন্য পছন্দের চিকিত্সার বিকল্প [৩]।যাইহোক, এই কেমোথেরাপি ওষুধগুলি বমি বমি ভাব, কার্সিনোজেনেসিস এবং জিনোটক্সিসিটির মতো প্রতিকূল পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া সৃষ্টি করে [৪]।তাই, G. duodenalis সংক্রমণ প্রতিরোধ করার জন্য আরও কার্যকরী কৌশল তৈরি করতে হবে।
ইনফ্ল্যামাসোমগুলি হল সাইটোসোলিক প্রোটিন কমপ্লেক্সের একটি শ্রেণী যা সহজাত ইমিউন প্রতিক্রিয়ার অংশ, যা রোগজীবাণু আক্রমণের বিরুদ্ধে রক্ষা করতে এবং প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যস্থতা করতে সহায়তা করে [5]।এই প্রদাহগুলির মধ্যে, নিউক্লিওটাইড-বাইন্ডিং অলিগোমারাইজেশন (NOD) রিসেপ্টর 3 (NLRP3) নিউক্লিওটাইড-বাইন্ডিং অলিগোমেরাইজেশন (NLRP3) নিউক্লিওটাইড-বাইন্ডিং-সদৃশ ইনফ্ল্যামাসোম ব্যাপকভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে কারণ এটি বিভিন্ন প্যাথোজেন/এমপিএপিএ-ড্যামেজ দ্বারা সনাক্ত করা যেতে পারে। DAMP), সহজাত ইমিউন সিস্টেমকে স্বীকৃতি দেয়, সক্রিয় করে।এবং অনেক প্রদাহজনক রোগে অন্ত্রের হোমিওস্টেসিস নিয়ন্ত্রণ করে [6,7,8]।এটি প্যাটার্ন রিকগনিশন রিসেপ্টর (PRR) NLRP3, একটি অ্যাডাপ্টার অ্যাপোপটোটিক স্পটেড প্রোটিন (ASC), এবং একটি ইফেক্টর প্রোকাস্পেস-1 বা প্রোকাস্পেস-11 নিয়ে গঠিত।NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম প্যাথোজেন আক্রমণের বিরুদ্ধে একটি হোস্ট হিসাবে কাজ করে, যেমনটি নিওস্পোরা ক্যানিনাম [৯], প্যারাকোকিডিওয়েডস ব্রাসিলিয়েনসিস [১০] এবং লেশম্যানিয়া গবেষণায় দেখা গেছে।[১১], তবে এটিও রিপোর্ট করা হয়েছে যে NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়করণ প্রতিরক্ষামূলক প্রতিরোধ ক্ষমতা সীমিত করে এবং রোগের অগ্রগতি বাড়িয়ে তোলে, উদাহরণস্বরূপ, কৃমিতে [12]।আমাদের পূর্ববর্তী অনুসন্ধানের উপর ভিত্তি করে, আমরা রিপোর্ট করেছি যে এক্সট্রা সেলুলার G. ডুওডেনালিস NLRP3 প্রদাহের অন্তঃকোষীয় সক্রিয়করণকে ট্রিগার করে এবং এক্সট্রা সেলুলার ভেসিকল (EVs) নিঃসৃত করে হোস্ট প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়াগুলিকে সংশোধন করে [১৩]।যাইহোক, ভিভোতে G. duodenalis সংক্রমণে NLRP3 প্রদাহের ভূমিকা নির্ধারণ করা বাকি আছে।
গিয়ার্ডিনগুলিকে মূলত G. duodenalis cytoskeleton-এর কাঠামোগত উপাদান হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছিল এবং ছোট অন্ত্রে ট্রফোজয়েট গতিশীলতা এবং এপিথেলিয়াল কোষ সংযুক্তিতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।পরিবেশের সাথে আরও ভালভাবে খাপ খাইয়ে নিতে এবং তাদের প্যাথোজেনিসিটি বাড়ানোর জন্য, G. duodenalis trophozoites একটি অনন্য সাইটোস্কেলিটাল গঠন তৈরি করেছে যার মধ্যে 8টি ফ্ল্যাজেলা, 1টি মধ্যম শরীর এবং 1টি ভেন্ট্রাল ডিস্ক রয়েছে [14]।গিয়ার্ডিয়া ডুডেনামের ট্রফোজয়েটগুলি তাদের সাইটোস্কেলটন ব্যবহার করে উপরের ছোট অন্ত্রে, বিশেষত ডুডেনাম প্রবেশ করে এবং এন্টারোসাইটের সাথে সংযুক্ত হয়।তারা ক্রমাগত স্থানান্তরিত হয় এবং কোষ বিপাক ব্যবহার করে এপিথেলিয়াল কোষের সাথে সংযুক্ত থাকে।অতএব, তাদের সাইটোস্কেলটন এবং ভাইরুলেন্সের মধ্যে একটি ঘনিষ্ঠ সম্পর্ক রয়েছে।Giardia duodenum-এর জন্য নির্দিষ্ট Giardines হল সাইটোস্কেলটন গঠনের উপাদান [15] এবং চারটি শ্রেণীতে বিভক্ত: α-, β-, γ-, এবং δ-giardines।α-giardin পরিবারের 21 জন সদস্য রয়েছে, যাদের সকলেরই ফসফোলিপিডগুলি বাঁধার ক্যালসিয়াম-নির্ভর ক্ষমতা রয়েছে [16]।তারা সাইটোস্কেলটনকে কোষের ঝিল্লির সাথেও সংযুক্ত করে।G. duodenalis দ্বারা সৃষ্ট ডায়রিয়ায় আক্রান্ত ব্যক্তিদের মধ্যে, α-giardins সংক্রমণের সময় অত্যন্ত প্রকাশ এবং ইমিউনোরেক্টিভ হয় [17]।Giardia alfa-1-এর উপর ভিত্তি করে হেটেরোলগাস ভ্যাকসিনগুলি ইঁদুরের giardiasis থেকে সুরক্ষিত এবং ভ্যাকসিন বিকাশের সম্ভাব্য প্রার্থী অ্যান্টিজেন [18]।আলফা-8 গিয়ার্ডিন, প্লাজমা ঝিল্লি এবং ফ্ল্যাজেলাতে স্থানান্তরিত, তবে ভেন্ট্রাল ডিস্কে নয়, জি ডুওডেনালিসে ট্রফোজয়েটগুলির গতিশীলতা এবং বৃদ্ধির হার বাড়ায় [১৯]।আলফা-14 গিয়ার্ডিন ফ্ল্যাজেলার মাইক্রোটিউবিউল স্ট্রাকচারের সাথে সংযুক্ত থাকে এবং জি. ডুওডেনালিস [20] এর কার্যকারিতাকে প্রভাবিত করে।আলফা-11 গিয়ার্ডিন জীবনচক্র জুড়ে প্রচুর পরিমাণে উপস্থিত থাকে এবং আলফা-11 গিয়ার্ডিনের অত্যধিক এক্সপ্রেশন জি ডুওডেনালিস নিজেই ক্ষতিগ্রস্থ হয় [২১]।যাইহোক, এটা স্পষ্ট নয় যে আলফা-2 গিয়ারডাইন এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিন জি ডুওডেনালিস সংক্রমণ এবং তাদের অন্তর্নিহিত প্রক্রিয়াগুলির বিরুদ্ধে সুরক্ষামূলক কিনা।
এই গবেষণায়, রিকম্বিন্যান্ট ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine এবং pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine হোস্ট NLRP3 সক্রিয় করতে মাউস প্রাইমারি পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে রূপান্তরিত হয়েছিল।তারপরে প্রদাহজনক লক্ষ্যগুলি স্ক্রীন করা হয়েছিল।আমরা জি ডুওডেনালিসের প্যাথোজেনিসিটিতে NLRP3 প্রদাহের ভূমিকাও মূল্যায়ন করেছি, আলফা-2 এবং আলফা-7,3 গিয়ার্ডাইনগুলি ভিভোতে NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়তা প্ররোচিত করে কিনা তা তদন্ত করে এবং নির্ধারণ করেছিলাম যে প্যাথোজেনেসিটিতে গিয়ারডিনের এই দুটি ভূমিকা G. duodenalis.আমাদের সাধারণ লক্ষ্য ছিল জি ডুওডেনালিস সংক্রমণ প্রতিরোধের জন্য প্রতিশ্রুতিবদ্ধ লক্ষ্যগুলি বিকাশ করা।
বন্য প্রকার (WT) C57BL/6 5-8 সপ্তাহ বয়সী মহিলা ইঁদুর লিয়াওনিং চ্যাংশেং এক্সপেরিমেন্টাল অ্যানিমাল সেন্টার (লিয়াওনিং, চীন) থেকে কেনা হয়েছিল।ইঁদুরের পানিতে বিনামূল্যে প্রবেশাধিকার ছিল, জীবাণুমুক্ত খাবার গ্রহণ করা হয়েছিল এবং 12/12 ঘন্টার আলো/অন্ধকার চক্রে রাখা হয়েছিল।সংক্রমণের আগে, ইঁদুররা অ্যাম্পিসিলিন (1 mg/mL), ভ্যানকোমাইসিন (1 mg/mL), এবং neomycin (1.4 mg/mL) (সবই সাংহাই, চীন, কৃত্রিম জীব থেকে কেনা) পানীয় জলে অ্যান্টিবায়োটিক অ্যাড লিবিটাম গ্রহণ করেছিল [22] ]।]।যে ইঁদুরগুলি 24 ঘন্টার জন্য খাওয়া এবং পান করার ক্ষমতা হারিয়েছে এবং ≥ 20% শরীরের ওজন হারিয়েছে তাদের সার্ভিকাল স্থানচ্যুতি দ্বারা মানবিকভাবে euthanized হয়েছে।
WB G. duodenalis trophozoites (American Type Culture Collection, Manassas, USA) 12.5% ​​ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (FBS; Every Green, Zhejiang, China) এবং 0.1% বোভাইন পিত্ত (Sigma-Aldrich, St. Missouri, USA) দিয়ে পরিপূরক ছিল। )মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) মাইক্রোঅ্যারোবিক অবস্থার অধীনে।সঙ্গমযুক্ত ট্রফোজয়েটগুলি বরফের উপর সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং আরও প্রজননের জন্য 1:4 অনুপাতে পাস করা হয়েছিল।
গিয়ার্ডিয়া ডুডেনাম সিস্টগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্ররোচিত হয়েছিল [২৩], ট্রফোজয়েটগুলি লগারিদমিক পর্যায়ে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপরে এনক্যাপসুলেশন ইনডুসিং মিডিয়াম, pH 7.1 (পরিবর্তিত TYI-S-33) দিয়ে 1 × 106 ট্রফোজয়েটস/মিলিমিটার চূড়ান্ত ঘনত্বে মিশ্রিত করা হয়েছিল।পিত্ত ঘনত্ব 0.05% মাঝারি)।লগারিদমিক বৃদ্ধির পর্যায় পর্যন্ত ট্রফোজয়েটগুলি 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে অ্যানেরোবিক অবস্থার অধীনে সংষ্কৃত হয়েছিল।মাধ্যমটিকে সিস্ট ইনডুসিং মিডিয়ামে পরিবর্তন করুন (pH 7.8; পরিবর্তিত TYI-S-33 মাধ্যম 1% পিত্ত ঘনত্বের সাথে) এবং কালচার G. ডুওডেনালিস 37°C তাপমাত্রায় 48-96 ঘন্টার জন্য, এই সময় একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে সিস্টের গঠন পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।বেশিরভাগ ট্রফোজয়েট সিস্ট গঠনের জন্য প্ররোচিত হওয়ার পরে, অবশিষ্ট ট্রফোজয়েটগুলিকে লাইজ করার জন্য সংস্কৃতির মিশ্রণটি সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং জীবাণুমুক্ত ডিআয়নাইজড জলে পুনঃস্থাপন করা হয়েছিল।ইঁদুরের গ্যাস্ট্রিক টিউবের মাধ্যমে পরবর্তী বিশ্লেষণের জন্য সিস্টগুলি গণনা করা হয়েছিল এবং 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা হয়েছিল।
গিয়ার্ডিয়া এক্সট্রা সেলুলার ভেসিকেলস (জিইভি) পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সমৃদ্ধ হয়েছিল [১৩]।লগারিদমিক বৃদ্ধির পর্যায়ে ট্রফোজয়েটগুলিকে পরিবর্তিত TYI-S-33 মাধ্যমে প্রস্তুত করা হয়েছে এক্সোসোম-ক্ষয়প্রাপ্ত FBS (বায়োলজিক্যাল ইন্ডাস্ট্রিজ, বেইট-হামেক, ইজরায়েল) এর সাথে 1 × 106 পরজীবী/mL এর চূড়ান্ত ঘনত্বে এবং 12 ঘন্টার জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল।10 মিনিটের জন্য 2000 গ্রাম, 45 মিনিটের জন্য 10,000 গ্রাম এবং 60 মিনিটের জন্য 100,000 গ্রাম সেন্ট্রিফিউগেশনের মাধ্যমে কালচার সুপারনাট্যান্ট থেকে বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল।ফসফেট বাফারযুক্ত স্যালাইনে (পিবিএস) দ্রবীভূত করা হয়েছিল, বিসিএ প্রোটিন অ্যাস কিট (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ওয়ালথাম, এমএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল এবং -80 ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা হয়েছিল বা আরও বিশ্লেষণের জন্য সরাসরি ব্যবহার করা হয়েছিল।
প্রাথমিক মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রস্তুত করা হয়েছিল [24]।সংক্ষেপে, ইঁদুরকে (6-8 সপ্তাহ বয়সী) 2.5 মিলি 2.98% ডিফকো লিকুইড থিওগ্লাইকল মিডিয়াম (বিডি, ফ্র্যাঙ্কলিন লেকস, এনজে, ইউএসএ) দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং 3-4টি তালু খাওয়ানো হয়েছিল।ইউথানেশিয়ার পরে ইঁদুরের পেটের গহ্বর থেকে ম্যাক্রোফেজগুলির একটি সাসপেনশন সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং 10 মিনিটের জন্য 1000 গ্রাম এ 3 বার সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল।কোষের বিশুদ্ধতা >98% না হওয়া পর্যন্ত CD11b মার্কার ব্যবহার করে ফ্লো সাইটোমেট্রি দ্বারা সংগ্রহ করা কোষগুলি সনাক্ত করা হয়েছিল, তারপর 6-ওয়েল সেল কালচার প্লেটে (4.5 x 106 কোষ/কূপ) যোগ করা হয়েছিল এবং 37°C তাপমাত্রায় 10% FBS (বায়োইন্ডাস্ট্রি) দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল।এবং 5% CO2।
TRIzol রিএজেন্ট (Vazyme, Nanjing, China) এর 1 মিলিলিটার মধ্যে 1 × 107 ট্রফোজয়েট থেকে RNA বের করা হয়েছিল, MonScript dsDNase (Monad, Wuhan, China) ব্যবহার করে মোট G. duodenalis RNA থেকে জিনোমিক ডিএনএ বের করা হয়েছিল এবং পরিপূরক DNA (সিডিএনএ) সিঙ্ক করা হয়েছিল। প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে MonScript RTIIII সুপার মিক্স (মোনাড) ব্যবহার করে।
লক্ষ্য G. duodenalis জিনের জন্য CDS ক্রম তথ্য NCBI GenBank থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।প্রতিটি টার্গেট জিনের জন্য নির্দিষ্ট বিজোড় ক্লোনিং প্রাইমার ডিজাইন করতে প্রাইমার 5.0 ব্যবহার করুন।ফরোয়ার্ড প্রাইমার (5′-3′) তিনটি অংশ নিয়ে গঠিত: একটি লিনিয়ারাইজড ভেক্টর pcDNA3.1(+) EcoRV (TGGTGGAATTCTGCAGAT) সহ একটি ওভারল্যাপিং সিকোয়েন্স এবং ATG এবং GNN কোডন শুরু করুন (যদি প্রথম বেস G না হয়)।এটি অভিব্যক্তির দক্ষতা উন্নত করার জন্য করা হয়।উপরন্তু, কমপক্ষে 16 bp সম্মিলিত ঘাঁটি (GC বিষয়বস্তু 40-60%/Tm প্রায় 55 °C)।বিপরীত প্রাইমার (5′-3′) দুটি অংশ নিয়ে গঠিত, একটি EcoRV-লিনিয়ারাইজড ভেক্টর pcDNA3.1(+) (GCCGCCACTGTGCTGGAT) সহ একটি ওভারল্যাপিং সিকোয়েন্স এবং কমপক্ষে 16 bp এর সম্মিলিত ভিত্তি।(শেষ দুটি স্টপ বাদে)।বেস) একটি কোডন যেমন AA বা GA রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিডগুলিকে তাদের লেবেলযুক্ত প্রোটিন প্রকাশ করতে দেয়)।প্রাইমার সিকোয়েন্সগুলি সারণি 1 এ তালিকাভুক্ত করা হয়েছে এবং কাংমেট বায়োটেকনোলজি কোং লিমিটেড (চাংচুন, চীন) দ্বারা সংশ্লেষিত হয়েছে।
Pfu DNA পলিমারেজ (Tiangen, Beijing, China) বা Ex-taq (Takara Biomedical Technology [Beijing] Co., Ltd., Beijing, China) একটি টেমপ্লেট হিসাবে প্রস্তুত G. duodenalis cDNA ব্যবহার করে লক্ষ্যগুলিকে প্রশস্ত করা হয়েছিল।ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন ভেক্টর প্লাজমিড pcDNA3.1(+) সীমাবদ্ধ এনজাইম EcoRV দিয়ে রৈখিক করা হয়েছিল এবং ফাস্ট এপি (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে ডিফোসফোরাইলেড হয়েছিল।লিনিয়ারাইজড pcDNA3.1(+) টুকরা এবং পরিবর্ধিত টার্গেট জিনের টুকরোগুলি একটি DNA জেল পরিশোধন কিট (Tiangen) ব্যবহার করে শুদ্ধ করা হয়েছিল এবং একটি Nanodrop ND-2000 (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।pcDNA3.1(+) খণ্ড এবং প্রতিটি টার্গেট জিন খণ্ড MonClone একক অ্যাসেম্বলি ক্লোনিং মিক্স (Monad Biotech Co., Ltd., Suzhou, China) ব্যবহার করে পুনরায় সংযুক্ত করা হয়েছিল এবং Comate Bioscience Company Limited (Changchun, China) ব্যবহার করে DNA সিকোয়েন্সিং দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল।.
এন্ডোটক্সিন-মুক্ত প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 এবং pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 SanPrep এন্ডোটক্সিন-মুক্ত প্লাজমিড মিনি কিট (সানগন বায়োটেক) ব্যবহার করে তৈরি করা হয়েছিল।ইলিউশন বাফারে EDTA যাতে স্থানান্তর পরীক্ষায় হস্তক্ষেপ না করে তা নিশ্চিত করার জন্য ঘনত্ব 500 ng/µl-এর উপরে বজায় রাখা হয়েছিল।প্রাথমিক মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজগুলি 12 ঘন্টার জন্য সম্পূর্ণ RPMI 1640 মিডিয়াম (বায়োলজিক্যাল ইন্ডাস্ট্রিজ) সহ 6-ওয়েল প্লেটে সংষ্কৃত করা হয়েছিল, তারপর পেনিসিলিন এবং স্ট্রেপ্টোমাইসিন অপসারণের জন্য কোষগুলিকে 3 বার উষ্ণ পিবিএসে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং তারপরে সম্পূর্ণ মাধ্যম দিয়ে পরিপূরক করা হয়েছিল।এন্ডোটক্সিন-মুক্ত প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 এবং pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 (2.5 μg) Opti-MEM হ্রাসকৃত সিরাম মাধ্যম (Gibco, Thermo Fisher Scientific) এর 125 μl এ পাতলা করা হয়েছিল।.তারপর Lipofectamine 2000 ট্রান্সফেকশন রিএজেন্টের 5 μl (Invitrogen, Thermo Fisher Scientific) 125 μl কম সিরাম Opti-MEM মিডিয়ামে পাতলা করা হয়েছিল।মিশ্রিত এন্ডোটক্সিন-মুক্ত প্লাজমিডকে Lipofectamine 2000 এর সাথে মিশিয়ে লাইপোসোম-ডিএনএ কমপ্লেক্স প্রস্তুত করুন এবং মিশ্রণটিকে 5 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় দাঁড়াতে দিন।প্রতিটি কূপের কোষে কমপ্লেক্সগুলিকে আলাদাভাবে স্থানান্তর করুন এবং ধীরে ধীরে মিশ্রিত করুন।4 ঘন্টা পরে, সেল কালচার মিডিয়ামটি সম্পূর্ণ RPMI 1640 মিডিয়ামের 2 মিলি দ্বারা প্রতিস্থাপিত হয়েছিল এবং 24 ঘন্টার জন্য সংস্কৃতি অব্যাহত ছিল।কোষগুলিতে তাজা কোষ সংস্কৃতির মাধ্যম যুক্ত করা হয়েছিল এবং অ্যাস ডিজাইনের উপর নির্ভর করে বিভিন্ন সময় পয়েন্টের জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল।
সুপারনাট্যান্ট এবং সেল লাইসেট থেকে প্রোটিন নমুনাগুলি পূর্বে বর্ণিত হিসাবে প্রস্তুত করা হয়েছিল [25]।প্রো-IL-1β, প্রো-ক্যাসপেস-1, ক্যাসপেস-1 p20, NLRP3, β-অ্যাক্টিন এবং হিস-ট্যাগের জন্য ঝিল্লি স্থানান্তর পরামিতিগুলি ছিল 200 mA/90 মিনিট।ইন্টারলিউকিন 1β (IL-1β; R&D Systems, Minneapolis, Minnesota, USA), caspase-1 (p20) (Adipogen, সুইজারল্যান্ড) এবং NLRP3 (Adipogen SA, Epalinges, সুইজারল্যান্ড) এবং 1:5000 এর জন্য তার ট্যাগ (Amylet Scientific, Amylet Scientific) উহান, চীন) এবং β-অ্যাক্টিন (প্রোটিনটেক, উহান, চীন)।
ডিসাকিনিমাইড সাবারেট (ডিএসএস) এর সাথে ক্রস-লিঙ্কিং পূর্বে বর্ণিত হিসাবে সঞ্চালিত হয়েছিল [26]।25 mM Na2PO4, 187.5 mM NaCl, 25 mM HEPES এবং 125 mM NaHCO3 সমন্বিত 50 μl ASC প্রতিক্রিয়া বাফারে (pH 8.0) ঠাণ্ডা PBS দিয়ে কোষগুলিকে 3 বার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল এবং 27 গেজ সুই দিয়ে সম্পূর্ণরূপে লাইজ করা হয়েছিল।মিশ্রণটি 3 মিনিটের জন্য 5000 গ্রাম সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল এবং 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 30 মিনিটের জন্য 10 μl DSS (DMSO তে 25 মিমি) এবং 40 μl ASC প্রতিক্রিয়া বাফার দিয়ে পেলেটটি সেলাই করা হয়েছিল।10 মিনিটের জন্য 5000 গ্রাম সেন্ট্রিফিউগেশনের পরে, পেলেটটি 40 μl ASC প্রতিক্রিয়া বাফার এবং 10 μl 6x প্রোটিন লোডিং বাফার (ট্রান্সজেন, বেইজিং, চীন) এর দ্রবণে দ্রবীভূত হয়েছিল এবং তারপরে 15 এর জন্য ঘরের তাপমাত্রায় দ্রবণটি নিভিয়ে দেওয়া হয়েছিল। মিনিট, তারপর 10 মিনিট ফুটান।প্রোটিন নমুনাগুলি তখন প্রাথমিক অ্যান্টি-এএসসি অ্যান্টিবডিগুলি (ওয়ানলেইবিও, শেনিয়াং, চীন) 1:500 এর তরল অনুপাত ব্যবহার করে ওয়েস্টার্ন ব্লটিং এর শিকার হয়েছিল।
পূর্বে বর্ণিত একটি পদ্ধতি অনুসরণ করে [১৩], সেল কালচার সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন IL-1β এর নিঃসরণ মাউস IL-1 বিটা ELISA কিট (ইনভিট্রোজেন, থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল।IL-1β স্ট্যান্ডার্ড বক্ররেখা ব্যবহার করে OD450nm মানকে প্রোটিনের ঘনত্বে রূপান্তর করুন।
কভারস্লিপের উপর প্রলিপ্ত কোষগুলিকে উষ্ণ পিবিএস-এ 3 বার আলতোভাবে ধৌত করা হয়েছিল, টিস্যু সেল ফিক্সেটিভ (বায়োশার্প, বেইজিং, চায়না) 10 মিনিটের জন্য ঘরের তাপমাত্রায় (আরটি), 0.1% ট্রাইটন এক্স-পারমিবিলাইজে 100 (পিবিএস-এ মিশ্রিত করা হয়েছে; বায়োশার্প) ) ঘরের তাপমাত্রায় 20 মিনিটের জন্য এবং 5% বোভাইন সিরাম অ্যালবুমিন (পিবিএস-এ) কক্ষ তাপমাত্রায় 2 ঘন্টা ব্লক করুন।তারপরে কোষগুলিকে যথাক্রমে ASC (1:100 dilution) বা NLRP3 (1:100 dilution) এর বিরুদ্ধে প্রাথমিক অ্যান্টিবডি সহ 4°C তাপমাত্রায় রাতারাতি ইনকিউব করা হয় এবং Cy3 লেবেলযুক্ত ছাগল-বিরোধী IgG(H+L) (1:400; EarthOx) , San Francisco, CA, USA) বা FITC-সংযোজিত ছাগল-বিরোধী মাউস IgG (1:400; Earthox) রাতভর 37°C তাপমাত্রায় 1 ঘন্টার জন্য অন্ধকারে।নিউক্লিয়াস 5 মিনিটের জন্য Hoechst 33258 (10 μg/ml; UE, Suzhou, China) দিয়ে দাগযুক্ত ছিল এবং একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপের (অলিম্পাস কর্পোরেশন, টোকিও, জাপান) অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
ইঁদুরগুলিকে চারটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল (প্রতিটি গ্রুপে n = 7): (i) পিবিএস-চিকিত্সা করা নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ (শুধুমাত্র পিবিএস; গ্যাভেজ 100 μl/মাউস পিবিএস এবং দৈনিক ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন 100 μl/মাউস পিবিএস 3 ঘন্টা পরে)।, একটানা 7 দিনের জন্য);(ii) নেতিবাচক কন্ট্রোল গ্রুপ MCC950 ইনহিবিটর দিয়ে চিকিত্সা করা হয় [27] (100 μl/মাউস PBS gavage এর মাধ্যমে, 3 ঘন্টা পরে, 10 mg/kg শরীরের ওজন [BW] MCC950 [PBS-এ] প্রতিদিন ইন্ট্রাপেরিটোনলি পরিচালনা করা হয়েছিল, সময়কাল 7 দিন);(iii) G. ডুওডেনালিস সিস্ট ইনফেকশন গ্রুপ (গ্যাভেজ দ্বারা 1.5 x 106 সিস্ট/মাউস, 3 ঘন্টা পরে, 100 μl/মাউস PBS ইন্ট্রাপেরিটোনলি 7 দিনের জন্য প্রতিদিন পরিচালিত হয়);(iv) G. duodenalis cyst সম্মিলিত সংক্রমণ গ্রুপ MCC950 ইনহিবিটর ট্রিটমেন্ট গ্রুপ (1.5×106 সিস্ট/মাউসের মাধ্যমে গ্যাভেজ, 10mg/kg শরীরের ওজন MCC950 intraperitoneally 7 দিনের জন্য প্রতিদিন 3h)।প্রতিটি ইঁদুরের শরীরের ওজন প্রতিদিন পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং 7 তম দিনে সমস্ত ইঁদুরকে euthanized করা হয়েছিল।কাটা ডুওডেনাম (3 সেমি লম্বা) 1 মিলি পিবিএস-এ ছোট ছোট টুকরো করে কাটা হয়েছিল, পিবিএস-এ 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে রাতারাতি সিস্টগুলি ধ্বংস হয়ে গিয়েছিল এবং জি ডুওডেনালিস ট্রফোজয়েটগুলি।তাজা ডুওডেনাম (1 সেমি লম্বা) হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন (H&E) দাগের জন্য বিচ্ছিন্ন ছিল।
ইঁদুর দুটি গ্রুপে বিভক্ত ছিল: (i) MOCK কন্ট্রোল গ্রুপ এবং (ii) MCC950 ইনহিবিটর গ্রুপ।প্রতিটি গ্রুপে পাঁচটি চিকিত্সা ছিল (n = 7/ট্রিটমেন্ট গ্রুপ): (i) পিবিএস চিকিত্সা নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ (শুধুমাত্র পিবিএস; 100 μl/মাউস পিবিএস, ইন্ট্রামাসকুলার (আইএম) ইনজেকশন (টিবিয়ালিস পূর্ববর্তী) [২৮, ২৯] ;( ii) pcDNA3.1(+) প্লাজমিড নেগেটিভ কন্ট্রোল গ্রুপ (100 µg/মাউস ডিএনএ, ইন্ট্রামাস্কুলার ইনজেকশনের মাধ্যমে); প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-আলফা-2 (100 μg/মাউস ডিএনএ, ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন দ্বারা) এবং (v) প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-আলফা-7.3 (100 μg/মাউস) দিয়ে চিকিত্সা করা একটি গ্রুপ DNA, 12 ঘন্টা অতিবাহিত হওয়ার পরে, MCC950 ইনহিবিটর গ্রুপের ইঁদুররা 7 দিনের জন্য MCC950 (10 মিলিগ্রাম/কেজি শরীরের ওজন) দৈনিক ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন পেয়েছে, যখন MOCK গ্রুপের ইঁদুরগুলি সমান পরিমাণে পিবিএস চিকিত্সা পেয়েছে৷ রক্তের নমুনাগুলি ছিল আইবল ইঁদুর থেকে সংগ্রহ করা হয় এবং 4 °C তাপমাত্রায় সিরামের নমুনাগুলি IL-1β মাত্রার জন্য এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) ব্যবহার করে বিচ্ছিন্ন করা হয়।
পঁয়ত্রিশটি ইঁদুরকে পাঁচটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল (n = 7/গ্রুপ)।গ্রুপ 1 একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপ ছিল যা পিবিএসের সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল: ইঁদুর 100 μl পিবিএস ইন্ট্রামাসকুলারলি এবং 3 দিন পরে গ্যাভেজ দ্বারা পেয়েছিল।গ্রুপ 2 হল একটি পজিটিভ কন্ট্রোল গ্রুপ যা জি ডুওডেনালিস সিস্ট দ্বারা সংক্রামিত: ইঁদুরকে 100 μl পিবিএস দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং 3 দিন পরে 1.5 x 106 সিস্ট/মাউসকে ইন্ট্রাগাস্ট্রিকভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।তৃতীয় গ্রুপ - ডুওডেনাল সিস্ট সংক্রমণের জন্য একটি নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের সাথে pcDNA3.1(+) এর সাথে প্লাজমিড ইমিউনাইজেশন: ইঁদুর 100 μg প্লাজমিড DNA pcDNA3.1(+)(im) মৌখিকভাবে পেয়েছে, বেশ কয়েকটির জন্য 1.5×106 সিস্ট/মাউস 3 দিনগ্রুপ 4 এবং 5 ছিল রিকম্বিন্যান্ট pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine plasmid or pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine প্লাজমিড G. duodenalis cyst সংক্রমণের সংমিশ্রণে।পরীক্ষামূলক গোষ্ঠী: ইঁদুর 100 µg pcDNA3 পেয়েছে।1(+)-গিয়ারডাইন প্লাজমিড ডিএনএ (im), তারপর 3 দিন পরে, 1.5 × 106 সিস্ট/মাউস গ্যাভেজের মাধ্যমে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।টিউবের মাধ্যমে জি ডুওডেনালিস সিস্ট প্রবর্তনের পর প্রতিটি মাউসের শরীরের ওজন পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।পরজীবী লোড পরিমাপ এবং এইচই স্টেনিং বিশ্লেষণের জন্য তাজা ডুডেনাম সংগ্রহ করা হয়েছিল।
হিস্টোপ্যাথোলজিকাল পরিবর্তনগুলি পূর্বে প্রকাশিত একটি পদ্ধতি অনুসারে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল [30]।তাজা ডুডেনাম টিস্যু সেল ফিক্সেটিভ দিয়ে স্থির করা হয়েছিল, প্যারাফিনে এম্বেড করা হয়েছিল, 4 μm বিভাগে কাটা হয়েছিল, H&E দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং একটি হালকা মাইক্রোস্কোপের নীচে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।সাতটি স্বাধীন ইঁদুরের সাতটি টিস্যু বিভাগে প্রতিনিধিত্বমূলক প্যাথলজিকাল পরিবর্তনগুলি চিকিত্সার বিষয়ে অজ্ঞাত একজন প্যাথলজিস্ট দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং 200x বৃদ্ধিতে বন্দী হয়েছিল।ভিলির দৈর্ঘ্য এবং ক্রিপ্টের গভীরতা পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে পরিমাপ করা হয়েছিল।
ভিট্রো এবং ভিভোতে ফলাফল তিন প্রতিলিপিতে পাওয়া গেছে।GraphPad Prism 7.00 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, USA) ব্যবহার করে গ্রাফ তৈরি করা হয়েছে।দুটি গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যগুলি টি-টেস্ট দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, যখন ≥3 গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যগুলি SPSS সফ্টওয়্যার (সংস্করণ 22.0; SPSS IBM Corp., Armonk, NY, USA) ব্যবহার করে একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।লেভেনের পরীক্ষা এবং বনফেরোনির পোস্ট-হক পরীক্ষা (বি) ব্যবহার করে বৈচিত্র্যের একজাতীয়তার জন্য ডেটা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।তাৎপর্য প্রকাশ করা হয় P<0.05, P<0.01, এবং P<0.001 (তাৎপর্যপূর্ণ নয় [ns]) (P>0.05)।
কিয়োটো এনসাইক্লোপিডিয়া অফ জিনস অ্যান্ড জিনোমস (কেইজিজি) এ আমাদের জিইভি প্রোটোমিক্সের পূর্ববর্তী বিশ্লেষণ দেখিয়েছে যে অনেক লক্ষ্য প্রদাহজনক সংকেত পথের সক্রিয়করণের সাথে জড়িত থাকতে পারে [১৩]।আমরা দুটি প্রতিশ্রুতিবদ্ধ লক্ষ্য নির্বাচন করেছি, আলফা-2 এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিন, এই অণুগুলিকে প্রশস্ত করে এবং pcDNA3.1(+) ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন ভেক্টর তৈরি করতে ব্যবহার করে।সিকোয়েন্সিংয়ের পরে, রিকম্বিন্যান্ট pcDNA3.1(+)-alpha-2 এবং alpha-7.3 giardine এক্সপ্রেশন প্লাজমিডগুলি প্রাথমিক মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে রূপান্তরিত হয়েছিল এবং প্রদাহের ক্যাসপেস-1 p20 সিগনেচার প্রোটিন (সক্রিয় ক্যাসপেস-1-এর একটি খণ্ড) চিহ্নিত করা হয়েছিল। প্রদাহকে ট্রিগার করতে পারে এমন মূল অণুগুলি ব্যাখ্যা করে।ফলাফলগুলি দেখায় যে আলফা-2 এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডাইনগুলি জিইভি-র অনুরূপ p20 ক্যাসপেস-1 অভিব্যক্তিকে প্ররোচিত করতে পারে।চিকিত্সাবিহীন নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ (শুধুমাত্র পিবিএস) এবং প্লাজমিড নিয়ন্ত্রণ pcDNA3.1(+) (চিত্র 1) এ ক্যাসপেস -1 অ্যাক্টিভেশনের কোনও প্রভাব পাওয়া যায়নি।
pcDNA3.1(+)-alpha-2 এবং alpha-7.3 giardins দ্বারা p20 ক্যাসপেস-1 সক্রিয়করণের পরিমাপ।রিকম্বিন্যান্ট ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 এবং alpha-7.3 giardines (প্রতিটি লেনের উপরে) প্রাথমিক মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে রূপান্তরিত হয়েছিল এবং কালচার সুপারনাট্যান্টগুলি 24 ঘন্টা পরে কাটা হয়েছিল।ওয়েস্টার্ন ব্লটিং সিগনেচার ক্যাসপেস-1 p20 ইনফ্ল্যামাসোম প্রোটিনের এক্সপ্রেশন লেভেল পরিমাপ করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।PBS-শুধুমাত্র চিকিত্সা গ্রুপ (লেন C) এবং pcDNA3.1(+) মনোথেরাপি গ্রুপ (pcDNA3.1 লেন) একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল এবং GEV চিকিত্সা গ্রুপ একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।প্রতিটি প্রোটিনে একটি হিস্টিডিন ট্যাগ সনাক্ত করে রিকম্বিন্যান্ট প্রোটিনের অভিব্যক্তি নিশ্চিত করা হয়েছিল এবং প্রত্যাশিত প্রোটিন ব্যান্ডগুলি ছিল আলফা-2 গিয়ারডাইন (38.2 কেডিএ) এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিন (37.2 কেডিএ)।GEV, Giardia duodenum extracellular vesicles, pcDNA3.1(+), EcoRV-লিনিয়ারাইজড ভেক্টর, SUP, supernatant
আলফা-2 গিয়ারডাইন এবং আলফা-7.3 গিয়ারডাইন p20 ক্যাসপেস-1 অভিব্যক্তিকে প্ররোচিত করে এবং হোস্ট NLRP3 প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া সক্রিয় করতে ভূমিকা পালন করে কিনা তা নির্ধারণ করতে, pcDNA3.1(+)-আলফা-2 giardine এবং pcDNA3.1(+)-আলফা -7.3 গিয়ারডিনকে রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ সহ প্রাথমিক মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে রূপান্তরিত করা হয়েছিল এবং মূল প্রদাহজনক প্রোটিন NLRP3 এর অভিব্যক্তি, স্থানীয়করণ এবং অলিগোমারাইজেশনের মাত্রা নির্ধারণ করা হয়েছিল।এই পরীক্ষায়, GEV পজিটিভ কন্ট্রোল গ্রুপ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল, এবং নো ট্রিটমেন্ট গ্রুপ (কেবল PBS) বা pcDNA3.1(+) ট্রান্সফেকশন ট্রিটমেন্ট গ্রুপ নেতিবাচক গ্রুপ ছিল।ফলাফলগুলি দেখায় যে, GEV গ্রুপের মতো, giardin pcDNA3.1(+)-alpha-2 এবং giardin pcDNA3.1(+)-alpha-7.3-এর রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ NLRP3, প্রো-IL-1β এবং প্রো-আইএল-1β-এর আপগ্র্যুলেশনের ফলে। procaspase-1 এবং caspase-1 সক্রিয়করণ (চিত্র 2a)।এছাড়াও, উভয় গিয়ারডিন উল্লেখযোগ্য IL-1β নিঃসরণকে প্ররোচিত করেছে (pcDNA3.1: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.1000; alpha-2 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.007 );alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P<0.0001;GEV: ANOVA, F(4, 10) = 1.625, P = 0.0047) (চিত্র 2b)।বেশিরভাগ ASC প্রোটিন নো-ট্রিটমেন্ট গ্রুপে মনোমেরিক ছিল বা pcDNA3.1(+) প্লাজমিড দিয়ে ট্রান্সফেক্ট করা ট্রিটমেন্ট গ্রুপে, pcDNA3.1(+)-আলফা-2 বা pcDNA3.1(+)-আলফা-এর বিপরীতে। 7.3 গিয়ার্ডিন।ASC অলিগোমারাইজেশন GEV পজিটিভ কন্ট্রোল গ্রুপ বা গ্রুপের রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিড ডিএনএ-তে ঘটেছে, একটি অলিগোমেরিক ফর্ম (চিত্র 2c) দেখাচ্ছে।এই প্রাথমিক তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে আলফা-2 গিয়ারডাইন এবং আলফা-7,3 গিয়ার্ডিন NLRP3 প্রদাহ সক্রিয়করণকে প্ররোচিত করতে পারে।ASC এবং NLRP3 এর স্থানীয়করণের পরবর্তী ইমিউনোফ্লুরোসেন্ট গবেষণায় দেখা গেছে যে নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীতে, ASC প্রোটিন সাইটোপ্লাজম জুড়ে ছড়িয়ে ছিটিয়ে ছিল এবং pcDNA3.1(+)-alpha-2 এর সাথে giardine বা pcDNA3 এর উদ্দীপনার সময় একটি বিন্দু সংকেত হিসাবে উপস্থিত হয়েছিল।1(+)-alpha-7,3 giardine গ্রুপ বা GEV পজিটিভ কন্ট্রোল গ্রুপ (চিত্র 2d)।নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ এবং প্লাজমিড-চিকিত্সা করা pcDNA 3.1 গ্রুপে, NLRP3 প্রোটিন সংকেত সনাক্ত করা যায়নি, যখন pcDNA3.1(+)-আলফা-2 giardine বা pcDNA3.1(+)-আলফা-7.3 এর প্রতিক্রিয়ায় একটি ফ্লুরোসেন্ট সংকেত বিন্দু। সনাক্ত করা হয়েছিল।.giardine সাইটোপ্লাজমে বা HEV এর উদ্দীপনায় পাওয়া যায় (চিত্র 2e)।এই তথ্যগুলি আরও দেখায় যে G. duodenalis giardin alpha-2 এবং giardin alpha-7.3 মাউসের প্রাথমিক পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে NLRP3 প্রদাহকে সক্রিয় করে।
pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin এবং pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin মাউসের পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয় করে।রিকম্বিন্যান্ট ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardin এবং pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardin কে প্রাথমিক মুরিন পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজ এবং কোষে স্থানান্তর করুন বা এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণের জন্য 24 ঘন্টার মধ্যে সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করুন, অলিগোমারাইজেশন। , নিঃসরণ।এবং মূল প্রদাহজনক প্রোটিনের স্থানীয়করণ।PBS-শুধুমাত্র (C) গ্রুপ এবং pcDNA3.1(+) একক চিকিত্সা গ্রুপ নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল, এবং GEV চিকিত্সা গ্রুপ ইতিবাচক গ্রুপ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা NLRP3, প্রো-IL-1β, প্রো-ক্যাসপেস-1 এবং p20 ক্যাসপেস-1 সহ একটি মূল প্রদাহজনক প্রোটিন NLRP3 সনাক্ত করা হয়েছিল।b সুপারন্যাট্যান্টগুলিতে IL-1β এর নিঃসরণের মাত্রা এনজাইম-লিঙ্কড ইমিউনোসর্বেন্ট অ্যাস (ELISA) ব্যবহার করে নির্ধারণ করা হয়েছিল।নিয়ন্ত্রণ এবং পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্যগুলি SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22.0 ব্যবহার করে ভিন্নতা (ANOVA) এর একমুখী বিশ্লেষণ দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।তারকাচিহ্নগুলি **P<0.01 এবং ***P<0.001 গ্রুপের মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।c পেলেটগুলিতে ASC অলিগোমারাইজেশন স্তরগুলি DSS ক্রস-লিঙ্কিং বিশ্লেষণ দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল, যখন সেল লাইসেটে ASC স্তরগুলি লোডিং নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।d ইমিউনোফ্লোরেসেন্স ব্যবহার করে আইএসসি স্থানীয়করণের ভিজ্যুয়ালাইজেশন।ইমিউনোফ্লোরেসেন্স NLRP3 এর স্থানীয়করণ কল্পনা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল।ASC, apoptotic speck-এর মত প্রোটিন;IL, interleukin;NLRP3, নিউক্লিওটাইড-বাইন্ডিং অলিগোমারাইজেশন-মত রিসেপ্টর 3;ns, উল্লেখযোগ্য নয় (P > 0.05)
G. duodenalis এবং GEV যেগুলি এটি নিঃসৃত করে উভয়ই NLRP3 প্রদাহকে সক্রিয় করে এবং ভিট্রোতে হোস্ট প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে।এইভাবে, জি. ডুওডেনালিসের প্যাথোজেনিসিটিতে NLRP3 প্রদাহের ভূমিকা অস্পষ্ট থেকে যায়।এই সমস্যাটি তদন্ত করার জন্য, আমরা G. duodenalis cyst দ্বারা সংক্রামিত ইঁদুর এবং G. duodenalis cyst + MCC950 ইনহিবিটর ট্রিটমেন্ট দ্বারা সংক্রমিত ইঁদুরের মধ্যে একটি পরীক্ষা ডিজাইন করেছি এবং G. duodenalis সিস্টে আক্রান্ত হলে NLRP3 প্রদাহজনক অভিব্যক্তির তুলনা করেছি।পরীক্ষার একটি বিস্তারিত স্কিম চিত্র 3a এ দেখানো হয়েছে।বিভিন্ন চিকিত্সা গোষ্ঠীতে ইঁদুরের শরীরের ওজনের পরিবর্তনগুলি সিস্টের সংক্রমণের পরে 7 দিনের জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং ফলাফলগুলি চিত্র 3বি-তে দেখানো হয়েছে।বিশুদ্ধ পিবিএস দ্বারা চিকিত্সা করা গ্রুপের তুলনায়, ফলাফলগুলি দেখায় যে (i) G. duodenalis cyst দ্বারা সংক্রমিত ইঁদুরের শরীরের ওজন সংক্রমণের পরে 3 দিন থেকে 7 দিন পর্যন্ত হ্রাস পেয়েছে;(ii) MCC950 ইনহিবিটারের সাথে চিকিত্সা ইঁদুরের শরীরের ওজনের উপর কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলেনি।.একক সংক্রমণ গোষ্ঠীর তুলনায়, MCC950 দিয়ে চিকিত্সা করা ডুওডেনাল সংক্রমণ গ্রুপের BW বিভিন্ন ডিগ্রীতে হ্রাস পেয়েছে (দিন 1: ANOVA, F(3, 24) = 1.885, P = 0.0148; দিন 2: ANOVA, F( 3, 24) ) = 0.4602, P<0.0001; দিন 3: ANOVA, F(3, 24) = 0.8360, P = 0.0010; ANOVA, F(3, 24) = 1.683, P = 0.0052 দিন FNO; (3, 24)=0.6497, P=0.0645; দিন 6: ANOVA, F(3, 24)=5.457, P=0.0175; ANOVA, F(3, 24) = 2.893, P = 0.0202)এই তথ্যগুলি দেখায় যে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম ডুওডেনাল সংক্রমণের প্রাথমিক পর্যায়ে (2-4 দিন) উল্লেখযোগ্য ওজন হ্রাস থেকে ইঁদুরকে রক্ষা করে।আমরা তখন ডুওডেনাল ল্যাভেজ ফ্লুইডের মধ্যে G. duodenalis trophozoites সনাক্ত করার লক্ষ্য রেখেছিলাম এবং ফলাফলগুলি চিত্র 3c এ দেখানো হয়েছে।জি. ডুওডেনালিস সিস্ট ইনফেকশন গ্রুপের তুলনায়, NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম (t(12) = 2.902, P = 0.0133) ব্লক করার পরে ডুওডেনামে ট্রফোজয়েটের সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে।শুধুমাত্র PBS এবং MCC950 এর সাথে চিকিত্সা করা নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণের তুলনায় HE এর সাথে দাগযুক্ত ডুওডেনাল টিস্যুগুলি দেখায়: (i) G. duodenalis cyst সংক্রমণের ফলে duodenal villi (ANOVA, F(3, 24)=0.4903, P= 0.0488 ক্ষতিগ্রস্থ হয় ) এবং ক্রিপ্ট অ্যাট্রোফি (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0.0089);(ii) G. duodenalis cysts দ্বারা সংক্রামিত ইঁদুরের ডুওডেনাম এবং MCC950 ইনহিবিটর দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছে।ডুওডেনাল ভিলি ক্ষতিগ্রস্ত এবং মৃত (ANOVA, F(3, 24) = 0.4903, P = 0.0144) atrophy এবং crypt branching (ANOVA, F(3, 24) = 0.4716, P = 0, 0481) (চিত্র 3d- চ)।এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম জি ডুওডেনালিসের প্যাথোজেনিসিটি কমাতে ভূমিকা পালন করে।
Giardia duodenum সংক্রমণে NLRP3 প্রদাহের ভূমিকা।ইঁদুরকে ডুওডেনোকোকাল সিস্ট দিয়ে গ্যাভেজ করা হয়েছিল (iv) এবং তারপর MCC950 (ip) দিয়ে বা ছাড়াই চিকিত্সা করা হয়েছিল।PBS বা MCC950 সহ একক চিকিত্সা গোষ্ঠীগুলি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।পরীক্ষামূলক গ্রুপ এবং চিকিত্সা পদ্ধতি।b বিভিন্ন চিকিত্সা গ্রুপের প্রতিটি ইঁদুরের শরীরের ওজন 7 দিনের জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।G. duodenalis সংক্রমণ গ্রুপ এবং G. duodenalis + MCC950 সংক্রমণ চিকিত্সা গ্রুপের মধ্যে পার্থক্য SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22.0 ব্যবহার করে টি-টেস্ট দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।তারকাচিহ্নগুলি *P<0.05, **P<0.01, অথবা ***P<0.001-এ উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।c ডুওডেনাল ল্যাভেজ তরলে ট্রফোজয়েটের সংখ্যা গণনা করে পরজীবী লোড নির্ধারণ করা হয়েছিল।G. duodenalis সংক্রমণ গ্রুপ এবং G. duodenalis + MCC950 সংক্রমণ চিকিত্সা গ্রুপের মধ্যে পার্থক্য SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22.0 ব্যবহার করে টি-টেস্ট দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।তারকাচিহ্নগুলি *P <0.05 এ উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।d হেমাটোক্সিলিন এবং ইওসিন (H&E) ডুওডেনাল হিস্টোপ্যাথোলজির দাগের ফলাফল।লাল তীরগুলি ভিলির ক্ষতি নির্দেশ করে, সবুজ তীরগুলি ক্রিপ্টগুলির ক্ষতি নির্দেশ করে।স্কেল বার: 100 µm।e, f ডুওডেনাল ভিলাসের উচ্চতা এবং মাউস ক্রিপ্টের উচ্চতার পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ।তারকাচিহ্নগুলি *P<0.05 এবং **P<0.01-এ উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।ফলাফল 7 স্বাধীন জৈবিক পরীক্ষা থেকে নেওয়া হয়.BW, শরীরের ওজন;ig, ইন্ট্রাগাস্ট্রিক ডেলিভারি রুট;ip, ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ডেলিভারি রুট;ns, উল্লেখযোগ্য নয় (P > 0.05);পিবিএস, ফসফেট বাফার স্যালাইন;WT, বন্য প্রকার
IL-1β এর নিঃসরণ প্রদাহ সক্রিয়করণের একটি বৈশিষ্ট্য।G. duodenalis alpha-2 giardine এবং alpha-7.3 giardine ভিভোতে NLRP3 হোস্ট ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয় করে কিনা তা নির্ধারণ করতে, আমরা চিকিত্সাবিহীন WT মাইস (শাম গ্রুপ) এবং NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম-ব্লকড মাউস (MCC950 ইনহিবিটেড ট্রিটমেন্ট গ্রুপ) ব্যবহার করেছি।পরীক্ষার একটি বিস্তারিত স্কিম চিত্র 4a এ দেখানো হয়েছে।পরীক্ষামূলক গোষ্ঠীগুলির মধ্যে রয়েছে পিবিএস, গ্যাভেজ দ্বারা জি. ডুওডেনালিস সিস্টের চিকিত্সা, pcDNA3.1 এর ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন এবং pcDNA3.1(+)-আলফা-2 গিয়ারডিন বা pcDNA3.1-আলফা-7.3 গিয়ারডিনের ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন।রিকম্বিন্যান্ট প্লাজমিডের ইন্ট্রামাসকুলার প্রশাসনের 7 তম দিনে, সিরাম সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং প্রতিটি গ্রুপে IL-1β এর স্তর নির্ধারণ করা হয়েছিল।চিত্র 4b তে দেখানো হয়েছে, MOCK গ্রুপে: (i) PBS গ্রুপের তুলনায়, pcDNA3.1 চিকিত্সা IL-1β নিঃসরণে কোন উল্লেখযোগ্য প্রভাব ফেলেনি (ANOVA, F(4.29)=4.062, P=0.9998), তবে, জি ডুওডেনালিস সিস্ট গ্রুপে (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0002), (ii) pcDNA3.1-alpha-2 giardine এবং pcDNA3-এ IL-β নিঃসরণ উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে।1- আলফা-7.3 গিয়ারডিনের ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন উল্লেখযোগ্যভাবে সিরাম IL-1β মাত্রা বৃদ্ধি করেছে (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P<0.0001);(iii) pcDNA3.1-alpha-7,3 giardine pcDNA3.1-alpha-2 giardine ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন গ্রুপে IL-1β ক্ষরণের উচ্চ মাত্রায় প্ররোচিত করে (ANOVA, F(4, 29) = 4.062, P = 0.0333) .MCC950 ট্রিটমেন্ট গ্রুপ এবং MOCK গ্রুপের প্রতিটি গ্রুপের সাথে তুলনা করে: (i) PBS কন্ট্রোল গ্রুপে IL-1β ক্ষরণের মাত্রা এবং pcDNA3.1 কন্ট্রোল গ্রুপ MCC950 ইনহিবিটর ব্লক করার পর একটি নির্দিষ্ট পরিমাণে হ্রাস পেয়েছে, কিন্তু পার্থক্য ছিল না। উল্লেখযোগ্য (PBS: ANOVA, F (9, 58) = 3.540, P = 0.4912 pcDNA3.1: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.5949);(ii) MCC950 ব্লক করার পরে।, IL-1β নিঃসরণ উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে G. duodenalis cyst-infected group, pcDNA3.1-alpha-2 giardine group, and pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine গ্রুপে (G. duodenalis: ANOVA, F(9) , 58) = 3.540 , P = 0.0120; pcDNA3.1-আলফা-2 giardine: ANOVA, F(9, 58) = 3.540, P = 0.0447; pcDNA3.1-আলফা-7.3 giardine: F95, ) = 3.540, P = 0.0164)।এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে আলফা-2 গিয়ারডাইন এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিন ভিভোতে NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয়করণের মধ্যস্থতা করে।
pcDNA3.1(+)-গিয়ার্ডিনগুলি ভিভোতে NLRP3 হোস্ট ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয় করে।ইঁদুরকে রিকম্বিন্যান্ট ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine বা pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল (IM) এবং তারপর MCC950 (ip; MCC950 গ্রুপ) বা না (ডামি গ্রুপ) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। )PBS বা pcDNA3.1(+) প্লাজমিড চিকিত্সা গ্রুপ একটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল, G. duodenalis সিস্ট চিকিত্সা গ্রুপ একটি ইতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।পরীক্ষামূলক গ্রুপ এবং চিকিত্সা পদ্ধতি।b ইঁদুরে IL-1β এর সিরাম স্তরগুলি ELISA অ্যাস দ্বারা 7 তম দিনে পরিমাপ করা হয়েছিল।MOCK গ্রুপের গ্রুপগুলির মধ্যে পার্থক্যগুলি একমুখী ANOVA ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, এবং SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22.0-এর টি-টেস্ট ব্যবহার করে MOCK গ্রুপ এবং MCC950 গ্রুপের মধ্যে পার্থক্যগুলি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।তারকাচিহ্নগুলি MOCK গ্রুপে চিকিত্সা গ্রুপগুলির মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে, *P<0.05 এবং ***P<0.001;ডলার চিহ্ন ($) MOCK গ্রুপের প্রতিটি গ্রুপ এবং P <0.05 এ MCC950 গ্রুপের মধ্যে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।সাতটি স্বাধীন জৈবিক পরীক্ষার ফলাফল।i, ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন, এনএস, উল্লেখযোগ্য নয় (P > 0.05)
G. duodenalis সংক্রামকতার উপর NLRP3 হোস্ট ইনফ্ল্যামাসোমের আলফা-2 এবং আলফা-7.3 গিয়ারডাইন-মধ্যস্থতা সক্রিয়করণের প্রভাব তদন্ত করতে, আমরা WT C57BL/6 ইঁদুর ব্যবহার করেছি এবং আলফা-2 গিয়ার্ডিন এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিন ইনজেকশন দিয়েছি।জি ডুওডেনালিস সিস্টের গ্যাস্ট্রিক টিউবের মাধ্যমে 3 দিন পর, ইন্ট্রামাসকুলারভাবে প্লাজমিড ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল, তারপরে ইঁদুরগুলি 7 দিন ধরে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।পরীক্ষার একটি বিস্তারিত স্কিম চিত্র 5a এ দেখানো হয়েছে।প্রতিটি মাউসের শরীরের ওজন প্রতিদিন পরিমাপ করা হয়েছিল, গ্যাস্ট্রিক টিউবের মাধ্যমে প্রশাসনের 7 তম দিনে তাজা ডুওডেনাল টিস্যুর নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল, ট্রফোজয়েটের সংখ্যা পরিমাপ করা হয়েছিল এবং হিস্টোপ্যাথোলজিকাল পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।চিত্র 5 বি তে দেখানো হয়েছে, খাওয়ানোর সময় বৃদ্ধির সাথে, প্রতিটি গ্রুপে ইঁদুরের BW ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পেয়েছে।G. duodenalis cysts-এর ইন্ট্রাগাস্ট্রিক প্রশাসনের পর ৩য় দিনে ইঁদুরের MT কমতে শুরু করে এবং তারপর ধীরে ধীরে বৃদ্ধি পায়।আলফা-২ গিয়ারডাইন এবং আলফা7.3 গিয়ার্ডিনের ইন্ট্রামাসকুলার ইনজেকশন দ্বারা প্ররোচিত NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়করণ ইঁদুরের ওজন হ্রাস উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস করেছে (দিন 1: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 1.39 = 0 .9754 দিন 1: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30)=1.399, P=0.9987 দিন 2: pcDNA3.1-আলফা-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.9979; দিন 2: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.3172, P = 0.8409 দিন 3: pcDNA3.1-আলফা-2 giardine, A 4, 30) = 0.8222, P = 0.0262 দিন 3: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.8222, P = 0.0083 দিন: pcDNA3.1-আলফা-এনও, , F(4, 30) = 0.5620, P = 0.0012, দিন 4: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5620, P <0.0001, দিন 5: pcDNA3.1-আলফা - 2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 দিন 5: pcDNA3.1-alpha -7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.9728, P < 0.0001 দিন 6: pcDNA -1 alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0012, দিন 6: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.7154, P = 0.0006;দিন 7: pcDNA3.1-alpha-2 giardine, ANOVA, F(4, 30) = 0.5369, P<0.0001 দিন 7: pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine, ANOVA, F(4 , 30) = 0.5369, P <0.0001)।পরজীবী লোড ডুডেনাম (চিত্র 5c) এ মূল্যায়ন করা হয়েছিল।অপরিশোধিত পজিটিভ কন্ট্রোল এবং খালি pcDNA3.1 ভেক্টরের সাথে ইনজেকশন করা গ্রুপের তুলনায়, α-2 giardine এবং α-7,3 giardine (pcDNA3.1-আলফা) দিয়ে ইনজেকশন করা গ্রুপগুলিতে G. duodenalis trophozoites-এর সংখ্যা উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে। -2 গিয়ারডাইন : ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0002, pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P<0.0001)।উপরন্তু, giardine alfa-7.3 giardine alfa-2 (ANOVA, F(3, 24) = 1.209, P = 0.0081) এর চেয়ে ইঁদুরের মধ্যে বেশি প্রতিরক্ষামূলক ছিল।HE staining এর ফলাফল চিত্রে দেখানো হয়েছে।5d–f.আলফা-২ গিয়ার্ডিন এবং আলফা-৭.৩ গিয়ারডিন দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া ইঁদুরের ডিওডেনাল টিস্যুর ক্ষত কম ছিল, যা ভিলাস ক্ষতির দ্বারা উদ্ভাসিত হয়, জি. ডুওডেনালিস দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া ইঁদুর এবং খালি pcDNA3 ভেক্টরের সংমিশ্রণে জি. ডুওডেনালিস দিয়ে ইনজেকশন দেওয়া ইঁদুরের তুলনায়।(pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, P = 0.0035 বা P = 0.0068; pcDNA3.1-alpha-7.3 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 2.466, = 0.0028 বা P = 0.0055) এবং হ্রাসকৃত ক্রিপ্ট অ্যাট্রোফি (pcDNA3.1-alpha-2 giardine: ANOVA, F(3, 24) = 1.470, P = 0.0264 বা P = 0.0158; pcDNA3.1-আলফা-নোয়ার্ড: , F(3, 24) = 1.470, P = 0.0371 বা P = 0.0191)।এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে আলফা-2 গিয়ার্ডিন এবং আলফা-7,3 গিয়ার্ডিন ভিভোতে NLRP3 প্রদাহকে সক্রিয় করে G. duodenalis-এর সংক্রামকতা হ্রাস করে।
জি ডুওডেনালিস সংক্রমণে pcDNA3.1(+)-গিয়ার্ডিনের ভূমিকা।ইঁদুরকে রিকম্বিন্যান্ট ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন প্লাজমিড pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine বা pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল (IM) এবং তারপর G. duodenalis cysts (ig) দিয়ে চ্যালেঞ্জ করা হয়েছিল।পিবিএস গ্রুপ এবং pcDNA3.1(+) + ডুওডেনাল সিস্ট ট্রিটমেন্ট গ্রুপটি নেতিবাচক কন্ট্রোল গ্রুপ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল এবং ডুওডেনাল সিস্ট ট্রিটমেন্ট গ্রুপটি ইতিবাচক কন্ট্রোল গ্রুপ হিসাবে ব্যবহার করা হয়েছিল।পরীক্ষামূলক গ্রুপ এবং চিকিত্সা পদ্ধতি।b বিভিন্ন চিকিত্সা গোষ্ঠীর প্রতিটিতে ইঁদুরের MT চ্যালেঞ্জের পরে 7 দিনের জন্য পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।তারকাচিহ্নগুলি G. duodenalis গোষ্ঠী এবং pcDNA3.1(+)-আলফা-2 giardine গ্রুপ, *P <0.05, **P <0.01, এবং ***P <0.001;ডলার চিহ্ন ($) G. duodenalis এবং pcDNA3.1(+)-আলফা-7.3 জার্ডিন গ্রুপ, $$P<0.01 এবং $$$P<0.001 এর মধ্যে একটি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।c ডুওডেনাম (3 সেমি লম্বা) থেকে 1 মিলি ডুওডেনাল ল্যাভেজে ট্রফোজয়েটের সংখ্যা গণনা করে এবং প্রতি সেমি ডুওডেনামের পরজীবীর সংখ্যা হিসাবে প্রকাশ করে পরজীবী লোড নির্ধারণ করা হয়েছিল।G. duodenalis সংক্রমণ গ্রুপ, pcDNA3.1(+)-alpha-2 giardine গ্রুপ, এবং pcDNA3.1(+)-alpha-7.3 giardine গ্রুপের মধ্যে পার্থক্য SPSS সফটওয়্যার সংস্করণ 22.0 ব্যবহার করে একমুখী ANOVA দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছে।তারকাচিহ্নগুলি **P<0.01 এবং ***P<0.001-এ উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।ডিউডেনামের হিস্টোপ্যাথলজিকাল পরিবর্তন।লাল তীরগুলি ভিলির ক্ষতি নির্দেশ করে, সবুজ তীরগুলি ক্রিপ্টগুলির ক্ষতি নির্দেশ করে।স্কেল বার: 100 µm।e, f মাউস ডুওডেনাল ভিলাস উচ্চতা (e) এবং ক্রিপ্ট উচ্চতা (f) এর পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ।SPSS সফ্টওয়্যার সংস্করণ 22.0 ব্যবহার করে একমুখী ANOVA দ্বারা চিত্র 1d-এ গোষ্ঠীর মধ্যে পার্থক্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।তারকাচিহ্নগুলি *P<0.05 এবং **P<0.01-এ উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে।সাতটি স্বাধীন জৈবিক পরীক্ষার ফলাফল।ns, উল্লেখযোগ্য নয় (P > 0.05)
Giardia duodenum হল মানুষ এবং অন্যান্য স্তন্যপায়ী প্রাণীদের একটি সুপরিচিত অন্ত্রের পরজীবী যা giardiasis সৃষ্টি করে।2004 সালে, এটি 6 বছর ধরে উচ্চ প্রসারের কারণে, বিশেষ করে নিম্ন আর্থ-সামাজিক অবস্থার সম্প্রদায়গুলিতে [৩২] ডাব্লুএইচও অবহেলিত রোগের উদ্যোগে অন্তর্ভুক্ত হয়েছিল।সহজাত ইমিউন সিস্টেম জি ডুওডেনালিস সংক্রমণের প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়াতে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।ইঁদুর ম্যাক্রোফেজগুলি বহির্কোষী ফাঁদগুলি ছেড়ে দিয়ে জি. ডুওডেনালিসকে গ্রাস করে এবং হত্যা করে বলে রিপোর্ট করা হয়েছে [৩৩]।আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে G. duodenalis, একটি অ-আক্রমণাত্মক বহির্কোষী পরজীবী, হোস্ট প্রদাহজনক প্রতিক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করতে মাউস ম্যাক্রোফেজে p38 MAPK, ERK, NF-κB p65, এবং NLRP3 প্রদাহজনক সংকেত পথগুলিকে সক্রিয় করে, এবং মুক্তিপ্রাপ্ত GEV এই প্রক্রিয়াটিকে উন্নত করতে পারে।13], 24]।যাইহোক, GEV-তে NLRP3 প্রদাহ-নিয়ন্ত্রিত প্রদাহের সাথে জড়িত সঠিক PAMPs এবং giardiasis-এ NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোমের ভূমিকা ব্যাখ্যা করা বাকি রয়েছে।এই দুটি প্রশ্নের উপর আলোকপাত করার জন্য, আমরা এই গবেষণাটি পরিচালনা করেছি।
NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম ইমিউন কোষের সাইটোপ্লাজমে অবস্থিত এবং বিভিন্ন কণা যেমন ইউরিক অ্যাসিড ক্রিস্টাল, টক্সিন, ব্যাকটেরিয়া, ভাইরাস এবং পরজীবী দ্বারা সক্রিয় হতে পারে।ব্যাকটেরিয়া গবেষণায়, টক্সিনগুলিকে মূল PAMP হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে যা প্রদাহজনক সেন্সরগুলিকে সক্রিয় করে, যা প্রদাহ এবং কোষের মৃত্যুর দিকে পরিচালিত করে [34]।কিছু গঠনগতভাবে বৈচিত্র্যময় টক্সিন, যেমন স্টাফিলোকক্কাস অরিয়াস [৩৫] এবং এসচেরিচিয়া কোলি [৩৬] থেকে হেমোলাইসিন, এন্টারোটক্সিন (এনএইচই) [৩৭] থেকে হেমোলাইসিন বিএল (এইচবিএল), NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়তা প্ররোচিত করে।ভাইরাল গবেষণায় দেখা গেছে যে ভাইরুলেন্স প্রোটিন যেমন SARS-COV-2 এনভেলপ (E) প্রোটিন [৩৮] এবং জিকা ভাইরাস NS5 প্রোটিন [৩৯] হল NLRP3 রিসেপ্টর দ্বারা স্বীকৃত গুরুত্বপূর্ণ PAMP।পরজীবী গবেষণায়, অনেক পরজীবী হোস্ট ইনফ্ল্যামাসোম অ্যাক্টিভেশনের সাথে যুক্ত বলে জানা গেছে, যেমন টক্সোপ্লাজমা গন্ডি, ট্রাইকোমোনাস ভ্যাজাইনালিস [৪০], ট্রাইপানোসোমা ক্রুজি [৪১], এবং লেশম্যানিয়া [৪২]।টক্সোপ্লাজমা গন্ডির ভাইরুলেন্সের সাথে যুক্ত GRA35, GRA42 এবং GRA43 ঘন গ্রানুল প্রোটিনগুলি লুইস ইঁদুরের ম্যাক্রোফেজগুলিতে পাইরোপ্টোসিস আনয়নের জন্য প্রয়োজনীয় [৪৩]।এছাড়াও, কিছু লেশম্যানিয়া গবেষণায় NLRP3 প্রদাহের সাথে জড়িত পৃথক অণুগুলির উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছে, যেমন প্যারাসাইট মেমব্রেন লিপোফসফোগ্লাইকান [44] বা জিঙ্ক মেটালোপ্রোটেজ [45]।জিনের অ্যানেক্সিন-সদৃশ আলফা-গিয়ারডিন পরিবারের মধ্যে, আলফা-1 গিয়ার্ডিন একটি সম্ভাব্য ভ্যাকসিন প্রার্থী হিসাবে দেখানো হয়েছে যা মাউস মডেলে জি ডুওডেনালিসের বিরুদ্ধে সুরক্ষা প্রদান করে [১৮]।আমাদের গবেষণায়, আমরা G. duodenalis virulence factors alpha-2 এবং alpha-7,3 giardines নির্বাচন করেছি, যেগুলো giardia-এর জন্য অনন্য কিন্তু তুলনামূলকভাবে কম রিপোর্ট করা হয়েছে।প্রদাহ সক্রিয়করণের বিশ্লেষণের জন্য এই দুটি লক্ষ্য জিনকে pcDNA3.1(+) ইউক্যারিওটিক এক্সপ্রেশন সিস্টেম ভেক্টরে ক্লোন করা হয়েছিল।
আমাদের মাউস মডেলে, ক্লিভড ক্যাসপেস টুকরোগুলি প্রদাহজনক সক্রিয়করণের চিহ্নিতকারী হিসাবে কাজ করে।উদ্দীপনার পরে, NLRP3 ASC-এর সাথে মিথস্ক্রিয়া করে, প্রোকাসপেস নিয়োগ করে এবং সক্রিয় ক্যাসপেস তৈরি করে যা প্রো-IL-1β এবং প্রো-IL-18 কে যথাক্রমে -18-এ পরিণত IL-1β এবং IL-18-এ বিভক্ত করে।প্রদাহজনক ক্যাসপেস (ক্যাসপেস-1, -4, -5 এবং -11) সিস্টাইন প্রোটিসের একটি সংরক্ষিত পরিবার যা সহজাত প্রতিরক্ষার জন্য গুরুত্বপূর্ণ এবং প্রদাহ এবং প্রোগ্রাম করা কোষের মৃত্যুর সাথে জড়িত [46]।ক্যাসপেস-১ ক্যানোনিকাল ইনফ্ল্যামাসোম দ্বারা সক্রিয় হয় [৪৭], যখন ক্যাসপেস-৪, -৫, এবং -১১ অ্যাটিপিকাল ইনফ্ল্যামাসোম গঠনের সময় ক্লিভ হয় [৪৮]।এই গবেষণায়, আমরা মডেল হিসাবে মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজ ব্যবহার করেছি এবং জি ডুওডেনালিস সংক্রমণের গবেষণায় হোস্ট NLRP3 প্রদাহ সক্রিয়করণের চিহ্নিতকারী হিসাবে p20 ক্যাসপেস-1 ক্লিভড ক্যাসপেস-1 তদন্ত করেছি।ফলাফলগুলি দেখায় যে অনেক আলফা-গিয়ারডিন প্রদাহের সাধারণ সক্রিয়করণের জন্য দায়ী, যা ব্যাকটেরিয়া এবং ভাইরাসের সাথে জড়িত মূল ভাইরুলেন্স অণুগুলির আবিষ্কারের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ।যাইহোক, আমাদের অধ্যয়নটি শুধুমাত্র একটি প্রাথমিক পর্দা এবং অন্যান্য অণু রয়েছে যা অ-শাস্ত্রীয় ইনফ্ল্যামাসোমগুলিকে সক্রিয় করতে পারে, যেমন আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় জি. ডুওডেনালিস সংক্রমণে শাস্ত্রীয় এবং অ-শাস্ত্রীয় উভয় ইনফ্ল্যামাসোম পাওয়া গেছে [১৩]।উৎপন্ন p20 ক্যাসপেস-1 NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোমের সাথে যুক্ত কিনা তা আরও নির্ধারণ করতে, আমরা মূল অণু প্রোটিন এক্সপ্রেশন স্তর এবং ASC অলিগোমারাইজেশন স্তর নির্ধারণ করতে আলফা-2 এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিনগুলিকে মাউস পেরিটোনিয়াল ম্যাক্রোফেজে স্থানান্তরিত করেছি, নিশ্চিত করে যে উভয় α-গিয়ারডিন সক্রিয় হয়। প্রদাহজনক NLRP3।আমাদের ফলাফল মানকো-প্রাইখোদা এট আল-এর থেকে কিছুটা আলাদা, যারা রিপোর্ট করেছেন যে G. মুরিস বা E. coli EPEC স্ট্রেনের সাথে Caco-2 কোষের উদ্দীপনা একাই NLRP3, ASC, এবং caspase-1 এর ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা বাড়াতে পারে, যদিও উল্লেখযোগ্যভাবে না, যদিও G. muris এবং E. coli-এর কস্টিমুলেশন কিভাবে তিনটি প্রোটিনের মাত্রা বাড়িয়েছে [49]।গিয়ার্ডিয়া প্রজাতি, কোষ লাইন এবং প্রাথমিক কোষের নির্বাচনের পার্থক্যের কারণে এই অমিল হতে পারে।আমরা 5-সপ্তাহ বয়সী মহিলা WT C57BL/6 ইঁদুরের MCC950 ব্যবহার করে ভিভো অ্যাসেস-এ পারফর্ম করেছি, যেগুলি G. duodenalis-এর জন্য বেশি সংবেদনশীল।MCC950 হল একটি শক্তিশালী এবং নির্বাচনী ছোট অণু NLRP3 ইনহিবিটার যা ন্যানোমোলার ঘনত্বে ক্যানোনিকাল এবং নন-ক্যানোনিকাল NLRP3 অ্যাক্টিভেশনকে ব্লক করে।MCC950 NLRP3 অ্যাক্টিভেশনকে বাধা দেয় কিন্তু AIM2, NLRC4, এবং NLRP1 প্রদাহজনক পথ বা TLR সংকেত পথের সক্রিয়করণকে প্রভাবিত করে না [27]।MCC950 NLRP3 অ্যাক্টিভেশনকে ব্লক করে কিন্তু NLRP3 সূচনা, K+ প্রবাহ, Ca2+ ইনফ্লাক্স বা NLRP3 এবং ASC-এর মধ্যে মিথস্ক্রিয়াকে বাধা দেয় না;পরিবর্তে, এটি ASC অলিগোমারাইজেশন [27] ব্লক করে NLRP3 প্রদাহজনক সক্রিয়করণকে বাধা দেয়।অতএব, আমরা জিয়ার্ডিন ইনজেকশনের পরে এনএলআরপি 3 ইনফ্ল্যামাসোমের ভূমিকা নির্ধারণ করতে একটি ইন ভিভো স্টাডিতে MCC950 ব্যবহার করেছি।সক্রিয় ক্যাসপেস-1 p10 প্রো-ইনফ্ল্যামেটরি সাইটোকাইন প্রো-IL-1β এবং প্রো-IL-18 কে পরিপক্ক IL-1β এবং IL-18 [50] তে বিভক্ত করে।এই সমীক্ষায়, MCC950 সহ বা ছাড়া গিয়ারডিন-চিকিত্সা করা ইঁদুরের সিরাম IL-1β স্তরগুলি NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয় হয়েছে কিনা তার সূচক হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।প্রত্যাশিত হিসাবে, MCC950 চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে সিরাম IL-1β মাত্রা হ্রাস করেছে।এই তথ্যগুলি স্পষ্টভাবে দেখায় যে G. duodenalis giardin alfa-2 এবং giardin alfa-7.3 NLRP3 মাউসের ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয় করতে সক্ষম।
গত এক দশকে জমে থাকা উল্লেখযোগ্য তথ্য প্রমাণ করেছে যে IL-17A হল G. muris এর বিরুদ্ধে অনাক্রম্যতার প্রধান নিয়ন্ত্রক, IL-17RA সংকেত প্ররোচিত করে, অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল পেপটাইড তৈরি করে এবং পরিপূরক সক্রিয়করণ [51] নিয়ন্ত্রণ করে।যাইহোক, তরুণ প্রাপ্তবয়স্কদের মধ্যে Giardia সংক্রমণ প্রায়শই ঘটে, এবং এটি রিপোর্ট করা হয়েছে যে তরুণ ইঁদুরের মধ্যে Giardia সংক্রমণ IL-17A এর প্রতিরক্ষামূলক প্রভাব প্রয়োগ করতে সক্রিয় করে না [52], গবেষকদের অন্যান্য ইমিউনোমোডুলেটরি গিয়ার্ডিয়া খোঁজার জন্য অনুরোধ করে।হেলমিন্থ সংক্রমণের প্রক্রিয়া।একটি সাম্প্রতিক গবেষণার লেখকরা জানিয়েছেন যে G. muris E. coli EPEC দ্বারা NLRP3 প্রদাহকে সক্রিয় করতে পারে, যা অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল পেপটাইডের উত্পাদনকে উৎসাহিত করে এবং এর সংযুক্তি ক্ষমতা এবং অন্ত্রের ট্র্যাফোজয়েটের সংখ্যা হ্রাস করে, যার ফলে কোলনের তীব্রতা হ্রাস পায়। ব্যাসিলি দ্বারা সৃষ্ট রোগ [49]।NLRP3 ইনফ্ল্যামাসোম বিভিন্ন রোগের বিকাশের সাথে জড়িত।গবেষণায় দেখা গেছে যে সিউডোমোনাস অ্যারুগিনোসা কোষের মৃত্যু এড়াতে ম্যাক্রোফেজে অটোফ্যাজি ট্রিগার করে এবং এই প্রক্রিয়াটি NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়করণের উপর নির্ভর করে [53]।এন. ক্যানিনামের জন্য, NLRP3 প্রদাহের প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি-মধ্যস্থতা হোস্টে এর প্রতিলিপিকে সীমিত করে, এটি একটি সম্ভাব্য থেরাপিউটিক লক্ষ্য করে তোলে [9]।Paracoccidioides brasiliensis মাউসের অস্থি মজ্জা থেকে প্রাপ্ত ডেনড্রাইটিক কোষগুলিতে NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়করণকে প্ররোচিত করতে পাওয়া গেছে, যার ফলে প্রদাহজনক সাইটোকাইন IL-1β নিঃসৃত হয়, যা হোস্ট প্রতিরক্ষায় গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে [10]।L. amazonensis, L. major, L. braziliensis এবং L. infantum chagasi সহ বেশ কিছু Leishmania প্রজাতি ম্যাক্রোফেজে NLRP3 এবং ASC-নির্ভর ক্যাসপেস-1 সক্রিয় করে, সেইসাথে লিশম্যানিয়া সংক্রমণ।NLRP3/ASC/caspase-1 জিনে ইঁদুরের ঘাটতিতে পরজীবী প্রতিলিপি তৈরি করা হয় [১১]।জাম্বোনি এট আল।লিশম্যানিয়া সংক্রমণ ম্যাক্রোফেজে NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়তা প্ররোচিত করে বলে জানা গেছে, যা অন্তঃকোষীয় পরজীবী প্রতিলিপিকে সীমিত করে।সুতরাং, লেশম্যানিয়া একটি পরিহারের কৌশল হিসাবে NLRP3 সক্রিয়করণকে বাধা দিতে পারে।ভিভো গবেষণায়, এনএলআরপি 3 ইনফ্ল্যামাসোম লেশম্যানিয়া নির্মূলে অবদান রেখেছিল, তবে টিস্যুগুলিকে প্রভাবিত করেনি [54]।বিপরীতভাবে, helminthiasis গবেষণায়, NLRP3 প্রদাহের সক্রিয়করণ গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল হেলমিনথিয়াসিসের বিরুদ্ধে হোস্টের প্রতিরক্ষামূলক অনাক্রম্যতাকে দমন করে [12]।শিগেলা বিশ্বব্যাপী ডায়রিয়া সৃষ্টিকারী প্রধান ব্যাকটেরিয়াগুলির মধ্যে একটি।এই ব্যাকটেরিয়াগুলি P2X7 রিসেপ্টর-মধ্যস্থ K+ ইফ্লাক্স, প্রতিক্রিয়াশীল অক্সিজেন প্রজাতি, লাইসোসোমাল অ্যাসিডিফিকেশন এবং মাইটোকন্ড্রিয়াল ক্ষতির মাধ্যমে IL-1β উৎপাদন প্ররোচিত করতে পারে।NLRP3 প্রদাহ নেতিবাচকভাবে ফাগোসাইটোসিস এবং শিগেলার বিরুদ্ধে ম্যাক্রোফেজের ব্যাকটেরিয়াঘটিত কার্যকলাপ নিয়ন্ত্রণ করে [55]।প্লাজমোডিয়াম গবেষণায় দেখা গেছে যে প্লাজমোডিয়াম দ্বারা সংক্রামিত AIM2, NLRP3 বা ক্যাসপেস-1 এর ঘাটতি ইঁদুর উচ্চ মাত্রার টাইপ 1 ইন্টারফেরন উত্পাদন করে এবং প্লাজমোডিয়াম সংক্রমণ [56] এর জন্য আরও প্রতিরোধী।যাইহোক, ইঁদুরে NLRP3 প্রদাহের প্যাথোজেনিক অ্যাক্টিভেশন প্ররোচিত করতে আলফা-2 গিয়ারডাইন এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডিনের ভূমিকা অস্পষ্ট।
এই গবেষণায়, MCC950 দ্বারা NLRP3 প্রদাহের বাধা BW হ্রাস করে এবং ইঁদুরের অন্ত্রের ল্যাভেজ তরলে ট্রফোজয়েটের সংখ্যা বৃদ্ধি করে, যার ফলে ডুওডেনাল টিস্যুতে আরও গুরুতর রোগগত পরিবর্তন হয়।Alpha-2 giardine এবং alpha-7.3 giardine হোস্ট মাউস NLRP3 প্রদাহকে সক্রিয় করে, মাউসের শরীরের ওজন বাড়ায়, অন্ত্রের ল্যাভেজ তরলে ট্রফোজয়েটের সংখ্যা কমায় এবং প্যাথলজিকাল ডুওডেনাল ক্ষত দূর করে।এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে G. duodenalis আলফা-2 giardine এবং alpha-7,3 giardine এর মাধ্যমে NLRP3 হোস্ট ইনফ্ল্যামাসোম সক্রিয় করতে পারে, ইঁদুরের মধ্যে G. ডুওডেনালিসের প্যাথোজেনিসিটি হ্রাস করে।
সম্মিলিতভাবে, আমাদের ফলাফলগুলি দেখায় যে আলফা-2 এবং আলফা-7.3 গিয়ার্ডাইনগুলি NLRP3 হোস্ট ইনফ্ল্যামাসোমের সক্রিয়করণকে প্ররোচিত করে এবং ইঁদুরের মধ্যে G. duodenalis-এর সংক্রামকতা হ্রাস করে।অতএব, এই অণুগুলি গিয়ার্ডিয়াসিস প্রতিরোধের জন্য প্রতিশ্রুতিবদ্ধ লক্ষ্য।
       Data supporting the results of this study can be obtained from the respective author at gongpt@jlu.edu.cn.
লিয়াং একেএস, লিয়াং এএএম, হুয়াং এএইচসি, সের্গি কেএম, কাম জেকেএম।জিয়ার্ডিয়াসিস: একটি ওভারভিউ।এটি সম্প্রতি প্রকাশিত হয়েছিল যে প্যাট ইনফ্লামের ওষুধে অ্যালার্জি রয়েছে।2019;13:134–43।
এসকোবেডো এএ, সিমারম্যান এস গিয়ার্ডিয়াসিস: ফার্মাকোথেরাপির একটি পর্যালোচনা।একজন ফার্মাসিস্টের বিশেষজ্ঞ মতামত।2007;8: 1885-902।
তিয়ান হুয়াফেং, চেন বিন, ওয়েন জিয়ানফেং।জিয়ার্ডিয়াসিস, ড্রাগ প্রতিরোধ এবং নতুন লক্ষ্য আবিষ্কার।ডিসঅর্ডার ড্রাগ টার্গেটকে সংক্রামিত করে।2010;10:295-302।
Wang Z, Zhang X, Xiao Yi, Zhang W, Wu X, Qin T, ইত্যাদি NLRP3 প্রদাহজনক এবং প্রদাহজনিত রোগ।অক্সাইড মেড সেল Longev.2020;2020:4063562।
চেন জিওয়াই, নুনেজ জি. অন্ত্রের প্রদাহ এবং ক্যান্সারে প্রদাহের ভূমিকা।গ্যাস্ট্রোএন্টারোলজি।2011;141:1986-99।
পেলেগ্রিনি সি, আন্তোনিওলি এল, লোপেজ-কাস্টেজন জি, ব্লান্দিজি সি, ফোরনাই এম. ক্যানোনিকাল এবং অ্যাটিপিকাল এনএলআরপি3 ইনফ্ল্যামাসোম অ্যাক্টিভেশন অনাক্রম্য সহনশীলতা এবং অন্ত্রের প্রদাহের সংযোগস্থলে।প্রাক-ইমিউন।2017; 8:36।
Li L, Wang XC, Gong PT, Zhang N, Zhang X, Li S, et al.ROS-মধ্যস্থ NLRP3 প্রদাহজনক সক্রিয়করণ এন. ক্যানিনাম সংক্রমণের প্রতিক্রিয়ার সাথে জড়িত।পরজীবী ভেক্টর।2020; 13:449।