Nature.com পরিদর্শন করার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ.আপনি যে ব্রাউজার সংস্করণটি ব্যবহার করছেন তাতে সীমিত CSS সমর্থন রয়েছে৷সেরা অভিজ্ঞতার জন্য, আমরা আপনাকে একটি আপডেট করা ব্রাউজার ব্যবহার করার পরামর্শ দিই (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে সামঞ্জস্য মোড অক্ষম করুন)৷ইতিমধ্যে, অব্যাহত সমর্থন নিশ্চিত করতে, আমরা স্টাইল এবং জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই সাইটটিকে রেন্ডার করব।
টক্সোপ্লাজমা গন্ডি একটি অন্তঃকোষীয় প্রোটোজোয়ান পরজীবী যা সংক্রামিত হোস্টের মাইক্রোএনভায়রনমেন্টকে সংশোধন করে এবং মস্তিষ্কের টিউমার বৃদ্ধির ঘটনার সাথে যুক্ত বলে পরিচিত।এই গবেষণায়, আমরা অনুমান করি যে টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ থেকে এক্সোসোমাল miRNA-21 মস্তিষ্কের টিউমার বৃদ্ধিকে উৎসাহিত করে।টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত BV2 মাইক্রোগ্লিয়া থেকে এক্সোসোমগুলি চিহ্নিত করা হয়েছিল এবং U87 গ্লিওমা কোষগুলির অভ্যন্তরীণকরণ নিশ্চিত করা হয়েছিল।এক্সোসোমাল মাইক্রোআরএনএ এক্সপ্রেশন প্রোফাইলগুলি টক্সোপ্লাজমা গন্ডি এবং টিউমার বাছাইয়ের সাথে যুক্ত মাইক্রোআরএনএ এবং মাইক্রোআরএনএ-21এ-5p এর অ্যারে ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।আমরা এক্সোসোমে miR-21 স্তর পরিবর্তন করে U87 গ্লিওমা কোষে টিউমার-সম্পর্কিত জিনের এমআরএনএ স্তরগুলি এবং মানব U87 গ্লিওমা কোষের বিস্তারের উপর এক্সোসোমের প্রভাবও তদন্ত করেছি।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি দ্বারা সংক্রামিত U87 গ্লিওমা কোষের এক্সোসোমে, মাইক্রোআরএনএ-21-এর অভিব্যক্তি বৃদ্ধি পায় এবং অ্যান্টিটিউমার জিন (ফক্সও1, পিটিএন এবং পিডিসিডি4) এর কার্যকলাপ হ্রাস পায়।টক্সোপ্লাজমা দ্বারা সংক্রামিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি U87 গ্লিওমা কোষের বিস্তারকে প্ররোচিত করে।Exosomes একটি মাউস টিউমার মডেলে U87 কোষের বৃদ্ধি প্ররোচিত করে।আমরা পরামর্শ দিই যে টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত BV2 মাইক্রোগ্লিয়াতে এক্সোসোমাল miR-21 বৃদ্ধি অ্যান্টিটিউমার জিনগুলিকে হ্রাস করে U87 গ্লিওমা কোষে কোষের বৃদ্ধির প্রবর্তক হিসাবে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারে।
এটি অনুমান করা হয় যে 2018 সালে বিশ্বব্যাপী উন্নত ক্যান্সারের 18.1 মিলিয়নেরও বেশি ক্ষেত্রে নির্ণয় করা হয়েছে, প্রতি বছর প্রায় 297,000 কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্রের টিউমার নির্ণয় করা হয়েছে (সমস্ত টিউমারের 1.6%)1।পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে মানুষের মস্তিষ্কের টিউমার হওয়ার ঝুঁকির কারণগুলির মধ্যে রয়েছে বিভিন্ন রাসায়নিক পণ্য, পারিবারিক ইতিহাস এবং মাথার থেরাপিউটিক এবং ডায়াগনস্টিক সরঞ্জাম থেকে আয়নাইজিং বিকিরণ।যাইহোক, এই ম্যালিগন্যান্সিগুলির সঠিক কারণ অজানা।বিশ্বব্যাপী সমস্ত ক্যান্সারের প্রায় 20% ভাইরাস, ব্যাকটেরিয়া এবং পরজীবী সহ সংক্রামক এজেন্ট দ্বারা সৃষ্ট হয়3,4।সংক্রামক রোগজীবাণু হোস্ট কোষের জেনেটিক প্রক্রিয়াকে ব্যাহত করে, যেমন ডিএনএ মেরামত এবং কোষ চক্র, এবং দীর্ঘস্থায়ী প্রদাহ এবং ইমিউন সিস্টেমের ক্ষতি হতে পারে5।
মানুষের ক্যান্সারের সাথে যুক্ত সংক্রামক এজেন্ট হল সবচেয়ে সাধারণ ভাইরাল প্যাথোজেন, যার মধ্যে হিউম্যান প্যাপিলোমাভাইরাস এবং হেপাটাইটিস বি এবং সি ভাইরাস রয়েছে।পরজীবী মানুষের ক্যান্সারের বিকাশে একটি সম্ভাব্য ভূমিকা পালন করতে পারে।স্কিস্টোসোমা, ওপিশোর্চিস ভিভেরিনি, ও. ফেলিনাস, ক্লোনোরচিস সাইনেনসিস এবং হাইমেনোলেপিস নানা নামে বেশ কিছু পরজীবী প্রজাতি 6,7,8 মানব ক্যান্সারের বিভিন্ন প্রকারে জড়িত।
টক্সোপ্লাজমা গন্ডি একটি অন্তঃকোষীয় প্রোটোজোয়ান যা সংক্রামিত হোস্ট কোষের মাইক্রোএনভায়রনমেন্ট নিয়ন্ত্রণ করে।এই পরজীবীটি বিশ্বের জনসংখ্যার আনুমানিক 30%কে সংক্রামিত করবে বলে অনুমান করা হয়েছে, যা সমগ্র জনসংখ্যাকে 9,10 ঝুঁকিতে ফেলেছে।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি কেন্দ্রীয় স্নায়ুতন্ত্র (সিএনএস) সহ গুরুত্বপূর্ণ অঙ্গগুলিকে সংক্রামিত করতে পারে এবং মারাত্মক অসুস্থতার কারণ হতে পারে যেমন মারাত্মক মেনিনজাইটিস এবং এনসেফালাইটিস, বিশেষত ইমিউনোকম্প্রোমাইজড রোগীদের ক্ষেত্রে।যাইহোক, টক্সোপ্লাজমা গন্ডিও সংক্রামিত হোস্টের পরিবেশকে পরিবর্তন করতে পারে কোষের বৃদ্ধি এবং প্রতিরোধ ক্ষমতা সম্পন্ন ব্যক্তিদের মধ্যে ইমিউন প্রতিক্রিয়া পরিবর্তন করে, যার ফলে একটি অ্যাসিম্পটমেটিক দীর্ঘস্থায়ী সংক্রমণ 9,11 বজায় থাকে।মজার বিষয় হল, T. gondii এর প্রাদুর্ভাব এবং মস্তিষ্কের টিউমারের ঘটনাগুলির মধ্যে পারস্পরিক সম্পর্কের পরিপ্রেক্ষিতে, কিছু প্রতিবেদনে পরামর্শ দেওয়া হয়েছে যে Vivo হোস্টে দীর্ঘস্থায়ী T. gondii সংক্রমণের কারণে পরিবেশগত পরিবর্তনগুলি টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্টের সাথে সাদৃশ্যপূর্ণ।
এক্সোসোমগুলি আন্তঃকোষীয় যোগাযোগকারী হিসাবে পরিচিত যা প্রতিবেশী কোষ থেকে প্রোটিন এবং নিউক্লিক অ্যাসিড সহ জৈবিক সামগ্রী সরবরাহ করে 16,17।এক্সোসোমগুলি টিউমার-সম্পর্কিত জৈবিক প্রক্রিয়াগুলিকে প্রভাবিত করতে পারে যেমন টিউমার মাইক্রোএনভায়রনমেন্টে অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোসিস, অ্যাঞ্জিওজেনেসিস এবং মেটাস্টেসিস।বিশেষ করে, miRNAs (miRNAs), ছোট নন-কোডিং RNAs দৈর্ঘ্যে প্রায় 22 নিউক্লিওটাইড, গুরুত্বপূর্ণ পোস্ট-ট্রান্সক্রিপশনাল জিন নিয়ন্ত্রক যা miRNA-প্ররোচিত সাইলেন্সিং কমপ্লেক্স (miRISC) এর মাধ্যমে মানব mRNA-এর 30% এর বেশি নিয়ন্ত্রণ করে।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি সংক্রামিত হোস্টে miRNA এক্সপ্রেশন নিয়ন্ত্রণ করে জৈবিক প্রক্রিয়া ব্যাহত করতে পারে।হোস্ট miRNA-তে পরজীবীর বেঁচে থাকার কৌশল অর্জনের জন্য হোস্ট জৈবিক প্রক্রিয়া নিয়ন্ত্রণের জন্য গুরুত্বপূর্ণ সংকেত রয়েছে।এইভাবে, T. gondii-এর সংক্রমণের পরে হোস্ট miRNA প্রোফাইলের পরিবর্তনগুলি অধ্যয়ন করা আমাদের হোস্ট এবং T. গন্ডির মধ্যে মিথস্ক্রিয়াকে আরও স্পষ্টভাবে বুঝতে সাহায্য করতে পারে।প্রকৃতপক্ষে, থিরুগ্নানাম এট আল।15 পরামর্শ দিয়েছে যে টি. গন্ডি টিউমার বৃদ্ধির সাথে সম্পর্কিত নির্দিষ্ট হোস্ট এমআইআরএনএ-তে তার অভিব্যক্তি পরিবর্তন করে মস্তিষ্কের কার্সিনোজেনেসিসকে উন্নীত করে এবং দেখেছে যে টি. গন্ডি পরীক্ষামূলক প্রাণীদের মধ্যে গ্লিওমাস সৃষ্টি করতে পারে।
এই গবেষণায় টক্সোপ্লাজমা BV2 দ্বারা সংক্রামিত হোস্ট মাইক্রোগ্লিয়াতে এক্সোসোমাল miR-21-এর পরিবর্তনের উপর দৃষ্টি নিবদ্ধ করা হয়েছে।আমরা FoxO1/p27 এর নিউক্লিয়াসে ধরে রাখার কারণে U87 গ্লিওমা কোষের বৃদ্ধিতে পরিবর্তিত এক্সোসোমাল miR-21-এর সম্ভাব্য ভূমিকা পর্যবেক্ষণ করেছি, যা ওভার এক্সপ্রেসড miR-21 এর লক্ষ্য।
BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি ডিফারেনশিয়াল সেন্ট্রিফিউগেশন ব্যবহার করে প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং সেলুলার উপাদান বা অন্যান্য ভেসিকেলগুলির সাথে দূষণ প্রতিরোধ করার জন্য বিভিন্ন পদ্ধতি দ্বারা যাচাই করা হয়েছিল।SDS-polyacrylamide জেল ইলেক্ট্রোফোরেসিস (SDS-PAGE) BV2 কোষ এবং এক্সোসোম (চিত্র 1A) থেকে নিষ্কাশিত প্রোটিনের মধ্যে স্বতন্ত্র নিদর্শন দেখিয়েছে এবং অ্যালিক্সের উপস্থিতির জন্য নমুনাগুলি মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যা এক্সোসোমাল প্রোটিন মার্কারগুলির পশ্চিমা ব্লটিং দ্বারা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।অ্যালিক্স লেবেলিং এক্সোসোম প্রোটিনে পাওয়া গেছে কিন্তু BV2 সেল লাইসেট প্রোটিনে নয় (চিত্র 1B)।এছাড়াও, BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোম থেকে বিশুদ্ধ আরএনএ একটি বায়োঅ্যানালাইজার ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।18S এবং 28S রাইবোসোমাল সাবুনিটগুলি খুব কমই এক্সোসোমাল আরএনএ মাইগ্রেশন প্যাটার্নে পরিলক্ষিত হয়েছিল, যা নির্ভরযোগ্য বিশুদ্ধতা নির্দেশ করে (চিত্র 1C)।অবশেষে, ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি দেখায় যে পর্যবেক্ষিত এক্সোসোমগুলি প্রায় 60-150 এনএম আকারের এবং একটি কাপের মতো গঠন ছিল যা এক্সোসোম মরফোলজি (চিত্র 1D)।
BV2 কোষ থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমের বৈশিষ্ট্য।(ক) নিরাপত্তা ডেটা শীট পৃষ্ঠা।প্রোটিনগুলি BV2 কোষ বা BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোম থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল।প্রোটিন প্যাটার্ন কোষ এবং exosome মধ্যে পার্থক্য.(বি) একটি এক্সোসোমাল মার্কার (অ্যালিক্স) এর ওয়েস্টার্ন ব্লট বিশ্লেষণ।(C) একটি বায়োঅ্যানালাইজার ব্যবহার করে BV2 কোষ এবং BV2 প্রাপ্ত এক্সোসোম থেকে বিশুদ্ধ আরএনএর মূল্যায়ন।সুতরাং, BV2 কোষে 18S এবং 28S রাইবোসোমাল সাবুনিটগুলি খুব কমই এক্সোসোমাল আরএনএ-তে পাওয়া গেছে।(D) ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি দেখিয়েছে যে BV2 কোষ থেকে বিচ্ছিন্ন এক্সোসোমগুলি 2% ইউরানাইল অ্যাসিটেট দিয়ে নেতিবাচকভাবে দাগযুক্ত ছিল।Exosomes আকারে প্রায় 60-150 nm এবং কাপ আকৃতির (গান এবং জং, অপ্রকাশিত ডেটা)।
কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি ব্যবহার করে U87 মানব গ্লিওমা কোষে BV2- থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির সেলুলার অভ্যন্তরীণকরণ পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।PKH26 লেবেলযুক্ত এক্সোসোমগুলি U87 কোষের সাইটোপ্লাজমে স্থানীয়করণ করা হয়।নিউক্লিয়াস DAPI (চিত্র 2A) দ্বারা দাগযুক্ত ছিল, যা নির্দেশ করে যে BV2- থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি হোস্ট কোষ দ্বারা অভ্যন্তরীণ করা যেতে পারে এবং প্রাপক কোষের পরিবেশকে প্রভাবিত করতে পারে।
U87 গ্লিওমা কোষে BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির অভ্যন্তরীণকরণ এবং টক্সোপ্লাজমা RH দ্বারা সংক্রামিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি U87 গ্লিওমা কোষগুলির প্রসারণ প্ররোচিত করে।(A) কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পরিমাপ করা U87 কোষ দ্বারা আবদ্ধ এক্সোসোম।U87 গ্লিওমা কোষগুলিকে PKH26 (লাল) লেবেলযুক্ত এক্সোসোম দিয়ে বা 24 ঘন্টা নিয়ন্ত্রণ ছাড়াই ইনকিউব করা হয়েছিল।নিউক্লিয়াসগুলিকে DAPI (নীল) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং তারপরে একটি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপের অধীনে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল (স্কেল বার: 10 μm, x 3000)।(বি) U87 গ্লিওমা কোষের বিস্তার সেল প্রসারণ অ্যাস দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল।U87 গ্লিওমা কোষগুলিকে নির্দেশিত সময়ের জন্য এক্সোসোম দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল। *পি <0.05 ছাত্রদের টি পরীক্ষা দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। *পি <0.05 ছাত্রদের টি পরীক্ষা দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। *P < 0,05 получено по t-критерию Стьюдента. *শিক্ষার্থীর টি-টেস্ট দ্বারা P <0.05। *পি < 0.05 通过学生t 检验获得. *পি <0.05 * P < 0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента. * P <0.05 ছাত্রদের টি-টেস্ট ব্যবহার করে প্রাপ্ত।
U87 গ্লিওমা কোষগুলিতে BV2- থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির অভ্যন্তরীণকরণ নিশ্চিত করার পরে, আমরা মানব গ্লিওমা কোষগুলির বিকাশে BV2- থেকে প্রাপ্ত টক্সোপ্লাজমা-উত্পন্ন এক্সোসোমগুলির ভূমিকা তদন্ত করতে কোষের প্রসারণ অ্যাসেস সম্পাদন করেছি।T. gondii-সংক্রমিত BV2 কোষ থেকে এক্সোসোম সহ U87 কোষের চিকিত্সা দেখায় যে T. gondii-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি নিয়ন্ত্রণের তুলনায় U87 কোষের উল্লেখযোগ্যভাবে উচ্চ বিস্তার ঘটায় (চিত্র 2B)।
উপরন্তু, U118 কোষের বৃদ্ধি U87 এর মতো একই ফলাফল ছিল, কারণ টক্সোপ্লাজমা উদ্দীপিত এক্সোসোমগুলি সর্বোচ্চ স্তরের বিস্তার ঘটায় (ডেটা দেখানো হয়নি)।এই তথ্যগুলির উপর ভিত্তি করে, আমরা নির্দেশ করতে পারি যে BV2- থেকে প্রাপ্ত টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত এক্সোসোমগুলি গ্লিওমা কোষের বিস্তারে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে।
টিউমারের বিকাশে টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির প্রভাব তদন্ত করতে, আমরা একটি জেনোগ্রাফ্ট মডেলের জন্য নগ্ন ইঁদুরগুলিতে U87 গ্লিওমা কোষগুলিকে ইনজেকশন দিয়েছিলাম এবং BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোম বা RH-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি ইনজেকশন দিয়েছিলাম।1 সপ্তাহের পরে টিউমারগুলি স্পষ্ট হওয়ার পরে, 5 টি ইঁদুরের প্রতিটি পরীক্ষামূলক গ্রুপকে টিউমারের আকার অনুসারে ভাগ করা হয়েছিল একই সূচনা বিন্দু নির্ধারণের জন্য, এবং টিউমারের আকার 22 দিনের জন্য পরিমাপ করা হয়েছিল।
U87 জেনোগ্রাফ্ট মডেলের ইঁদুরগুলিতে, 22 তম দিনে (চিত্র 3A,B) BV2- থেকে প্রাপ্ত RH-সংক্রমিত এক্সোসোম গ্রুপে উল্লেখযোগ্যভাবে বড় টিউমারের আকার এবং ওজন লক্ষ্য করা গেছে।অন্যদিকে, বিভি 2-প্রাপ্ত এক্সোসোম গ্রুপ এবং এক্সোসোম চিকিত্সার পরে নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর মধ্যে টিউমারের আকারে কোনও উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না।উপরন্তু, গ্লিওমা কোষ এবং এক্সোসোমগুলির সাথে ইনজেকশন করা ইঁদুরগুলি আরএইচ-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির (চিত্র 3C) গোষ্ঠীর মধ্যে সবচেয়ে বড় টিউমারের পরিমাণ প্রদর্শন করে।এই ফলাফলগুলি দেখায় যে BV2- থেকে প্রাপ্ত টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত এক্সোসোমগুলি মাউস টিউমার মডেলে গ্লিওমা বৃদ্ধিকে প্ররোচিত করে।
একটি U87 জেনোগ্রাফ্ট মাউস মডেলে BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমের অনকোজেনেসিস (AC)।বিএএলবি/সি নগ্ন ইঁদুরে টিউমারের আকার (এ) এবং ওজন (বি) উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে যা বিভি2 থেকে প্রাপ্ত আরএইচ-সংক্রমিত এক্সোসোমগুলির সাথে চিকিত্সা করা হয়েছিল।বিএএলবি/সি নগ্ন ইঁদুর (সি) ম্যাট্রিজেল মিশ্রণে স্থগিত 1 x 107 U87 কোষের সাথে সাবকুটেনিয়াসভাবে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।ইনজেকশনের ছয় দিন পরে, 100 μg BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি ইঁদুরে চিকিত্সা করা হয়েছিল।টিউমারের আকার এবং ওজন যথাক্রমে নির্দেশিত দিনে এবং বলিদানের পরে পরিমাপ করা হয়েছিল। *পি <0.05। *পি <0.05। *R < 0,05। *পি <0.05। *পি <0.05। *পি <0.05। *R < 0,05। *পি <0.05।
তথ্য দেখায় যে অনাক্রম্যতা বা টিউমারের বিকাশের সাথে যুক্ত 37টি miRNAs (16টি অতিরিক্ত এক্সপ্রেসড এবং 21টি ডাউন এক্সপ্রেসড) টক্সোপ্লাজমা আরএইচ স্ট্রেন (চিত্র 4A) দ্বারা সংক্রমণের পরে মাইক্রোগ্লিয়াতে উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তিত হয়েছিল।পরিবর্তিত miRNA গুলির মধ্যে miR-21 এর আপেক্ষিক অভিব্যক্তি স্তরগুলি BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলিতে রিয়েল-টাইম RT-PCR দ্বারা নিশ্চিত করা হয়েছিল, BV2 এবং U87 কোষগুলির সাথে চিকিত্সা করা এক্সোসোমগুলি।miR-21-এর অভিব্যক্তি টক্সোপ্লাজমা গন্ডি (আরএইচ স্ট্রেন) (চিত্র 4বি) দ্বারা সংক্রামিত BV2 কোষ থেকে এক্সোসোমে উল্লেখযোগ্য বৃদ্ধি দেখায়।BV2 এবং U87 কোষে miR-21 এর আপেক্ষিক অভিব্যক্তির মাত্রা পরিবর্তিত এক্সোসোম গ্রহণের পর বৃদ্ধি পেয়েছে (চিত্র 4B)।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি (ME49 স্ট্রেন) দ্বারা সংক্রমিত টিউমার রোগীদের মস্তিষ্কের টিস্যুতে miR-21 এক্সপ্রেশনের আপেক্ষিক মাত্রা যথাক্রমে নিয়ন্ত্রণের চেয়ে বেশি ছিল (চিত্র 4C)।এই ফলাফলগুলি ভিট্রো এবং ভিভোতে ভবিষ্যদ্বাণী করা এবং নিশ্চিত মাইক্রোআরএনএগুলির প্রকাশের স্তরের মধ্যে পার্থক্যের সাথে সম্পর্কযুক্ত।
টক্সোপ্লাজমা গন্ডি (আরএইচ) দ্বারা সংক্রামিত মাইক্রোগ্লিয়াতে এক্সোসোমাল miP-21a-5p এর অভিব্যক্তিতে পরিবর্তন।(A) T. gondii RH সংক্রমণের পরে অনাক্রম্যতা বা টিউমার বিকাশের সাথে যুক্ত siRNA-তে উল্লেখযোগ্য পরিবর্তনগুলি দেখায়।(বি) আপেক্ষিক miR-21 এক্সপ্রেশন স্তরগুলি রিয়েল-টাইম RT-PCR দ্বারা BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোম, BV2-চিকিত্সা করা এক্সোসোম এবং U87 কোষে সনাক্ত করা হয়েছিল।(C) আপেক্ষিক miR-21 এক্সপ্রেশন স্তরগুলি টিউমার রোগীদের মস্তিষ্কের টিস্যুতে পাওয়া গেছে (N = 3) এবং টক্সোপ্লাজমা গন্ডি (ME49 স্ট্রেন) (N = 3) দ্বারা সংক্রামিত ইঁদুর। *পি <0.05 ছাত্রদের টি পরীক্ষা দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। *পি <0.05 ছাত্রদের টি পরীক্ষা দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *পি <0.05 ছাত্রদের টি-টেস্ট ব্যবহার করে প্রাপ্ত হয়েছিল। *পি < 0.05 通过学生t 检验获得. *পি <0.05 * পি <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента। * P <0.05 ছাত্রদের টি-টেস্ট ব্যবহার করে প্রাপ্ত।
আরএইচ-সংক্রমিত BV2 কোষ থেকে এক্সোসোমগুলি ভিভো এবং ইন ভিট্রোতে গ্লিওমাসের বৃদ্ধির দিকে পরিচালিত করে (চিত্র 2, 3)।প্রাসঙ্গিক mRNAs সনাক্ত করতে, আমরা BV2 বা RH BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোম দ্বারা সংক্রামিত U87 কোষে অ্যান্টিটিউমার টার্গেট জিনের mRNA স্তর, ফর্কহেড বক্স O1 (FoxO1), PTEN এবং প্রোগ্রামড সেল ডেথ 4 (PDCD4) পরীক্ষা করেছি।বায়োইনফরমেটিক্স বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে FoxO1, PTEN, এবং PDCD4 জিন সহ বেশ কয়েকটি টিউমার-সম্পর্কিত জিনের miR-2121,22 বাইন্ডিং সাইট রয়েছে।RH-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলিতে BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির (চিত্র 5A) তুলনায় অ্যান্টিটিউমার টার্গেট জিনের mRNA মাত্রা হ্রাস পেয়েছে।FoxO1 RH-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলিতে BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির (চিত্র 5B) তুলনায় প্রোটিনের মাত্রা হ্রাস করেছে।এই ফলাফলগুলির উপর ভিত্তি করে, আমরা নিশ্চিত করতে পারি যে RH- সংক্রমিত BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি অ্যান্টি-অনকোজেনিক জিনগুলিকে নিয়ন্ত্রণ করে, টিউমার বৃদ্ধিতে তাদের ভূমিকা বজায় রাখে।
টক্সোপ্লাজমা আরএইচ-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি টক্সোপ্লাজমা আরএইচ-সংক্রমিত BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি দ্বারা U87 গ্লিওমা কোষে অ্যান্টিটিউমার জিনকে দমন করতে প্ররোচিত করে।(A) PBS এক্সোসোমের তুলনায় T. gondii RH-সংক্রমিত BV2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমে FoxO1, PTEN এবং PDCD4 এক্সপ্রেশনের রিয়েল-টাইম পিসিআর।β-actin mRNA একটি নিয়ন্ত্রণ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।(বি) ফক্সও 1 এক্সপ্রেশনটি ওয়েস্টার্ন ব্লটিং দ্বারা নির্ধারিত হয়েছিল এবং ইমেজজে প্রোগ্রাম ব্যবহার করে ঘনত্বের ডেটা পরিসংখ্যানগতভাবে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। *পি <0.05 ছাত্রদের টি পরীক্ষা দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। *পি <0.05 ছাত্রদের টি পরীক্ষা দ্বারা প্রাপ্ত হয়েছিল। *P < 0,05 было получено с помощью t-критерия Стьюдента. *পি <0.05 ছাত্রদের টি-টেস্ট ব্যবহার করে প্রাপ্ত হয়েছিল। *পি < 0.05 通过学生t 检验获得. *পি <0.05 * পি <0,05, полученный с помощью t-критерия Стьюдента। * P <0.05 ছাত্রদের টি-টেস্ট ব্যবহার করে প্রাপ্ত।
টিউমার-সম্পর্কিত জিন নিয়ন্ত্রণে এক্সোসোমগুলিতে miP-21-এর প্রভাব বোঝার জন্য, U87 কোষগুলি Lipofectamine 2000 ব্যবহার করে miP-21 এর একটি ইনহিবিটর দিয়ে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং কোষগুলি স্থানান্তরের 24 ঘন্টা পরে সংগ্রহ করা হয়েছিল।miR-21 ইনহিবিটর দ্বারা স্থানান্তরিত কোষগুলিতে FoxO1 এবং p27 এক্সপ্রেশন স্তরগুলিকে qRT-PCR (চিত্র 6A,B) ব্যবহার করে BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির সাথে চিকিত্সা করা কোষগুলির সাথে তুলনা করা হয়েছিল।U87 কোষে miR-21 ইনহিবিটারের স্থানান্তর উল্লেখযোগ্যভাবে FoxO1 এবং p27 অভিব্যক্তিকে হ্রাস করেছে (ছবি 6)।
RH-সংক্রমিত এক্সোসোমাল BV2-প্রাপ্ত miP-21 U87 গ্লিওমা কোষে FoxO1/p27 অভিব্যক্তি পরিবর্তন করেছে।U87 কোষগুলি Lipofectamine 2000 ব্যবহার করে miP-21 ইনহিবিটর দিয়ে স্থানান্তরিত হয়েছিল এবং স্থানান্তরের 24 ঘন্টা পরে কোষগুলি সংগ্রহ করা হয়েছিল।miR-21 ইনহিবিটর দ্বারা স্থানান্তরিত কোষগুলিতে FoxO1 এবং p27 এক্সপ্রেশন স্তরগুলিকে qRT-PCR (A, B) ব্যবহার করে BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলির সাথে চিকিত্সা করা কোষগুলির স্তরের সাথে তুলনা করা হয়েছিল।
হোস্টের রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতা থেকে বাঁচতে, টক্সোপ্লাজমা পরজীবী একটি টিস্যু সিস্টে রূপান্তরিত হয়।তারা হোস্টের সারা জীবন জুড়ে মস্তিষ্ক, হৃৎপিণ্ড এবং কঙ্কালের পেশী সহ বিভিন্ন টিস্যুকে পরজীবী করে এবং হোস্টের রোগ প্রতিরোধ ক্ষমতাকে সংশোধন করে।উপরন্তু, তারা কোষ চক্র এবং হোস্ট কোষের অ্যাপোপটোসিস নিয়ন্ত্রণ করতে পারে, তাদের বিস্তারকে প্রচার করে 14,24।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি প্রধানত হোস্ট ডেনড্রাইটিক কোষ, নিউট্রোফিল এবং মনোসাইট/ম্যাক্রোফেজ বংশকে সংক্রামিত করে, যার মধ্যে মস্তিষ্কের মাইক্রোগ্লিয়াও রয়েছে।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি M2 ফিনোটাইপের ম্যাক্রোফেজগুলির পার্থক্যকে প্ররোচিত করে, প্যাথোজেন সংক্রমণের পরে ক্ষত নিরাময়কে প্রভাবিত করে এবং হাইপারভাসকুলারাইজেশন এবং গ্রানুলোমাটাস ফাইব্রোসিসের সাথেও যুক্ত।টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণের এই আচরণগত প্যাথোজেনেসিস টিউমারের বিকাশের সাথে যুক্ত মার্কারগুলির সাথে সম্পর্কিত হতে পারে।টক্সোপ্লাজমা দ্বারা নিয়ন্ত্রিত প্রতিকূল পরিবেশ প্রাক-ক্যানসারের সাথে সাদৃশ্যপূর্ণ হতে পারে।অতএব, এটি অনুমান করা যেতে পারে যে টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ মস্তিষ্কের টিউমারগুলির বিকাশে অবদান রাখতে পারে।প্রকৃতপক্ষে, বিভিন্ন মস্তিষ্কের টিউমারের রোগীদের সিরামে টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণের উচ্চ হার রিপোর্ট করা হয়েছে।এছাড়াও, টক্সোপ্লাজমা গন্ডি আরেকটি কার্সিনোজেনিক প্রভাবক হতে পারে এবং অন্যান্য সংক্রামক কার্সিনোজেনগুলিকে মস্তিষ্কের টিউমার বিকাশে সহায়তা করার জন্য সিনারজিস্টিকভাবে কাজ করে।এই বিষয়ে, এটি লক্ষণীয় যে পি ফ্যালসিপেরাম এবং এপস্টাইন-বার ভাইরাস সিনারজিস্টিকভাবে বার্কিটের লিম্ফোমা গঠনে অবদান রাখে।
ক্যান্সার গবেষণার ক্ষেত্রে নিয়ন্ত্রক হিসাবে এক্সোসোমের ভূমিকা ব্যাপকভাবে তদন্ত করা হয়েছে।যাইহোক, পরজীবী এবং সংক্রামিত হোস্টের মধ্যে এক্সোসোমের ভূমিকা খারাপভাবে বোঝা যায় না।এখনও অবধি, নিঃসৃত প্রোটিন সহ বিভিন্ন নিয়ন্ত্রক জৈবিক প্রক্রিয়াগুলি ব্যাখ্যা করেছেন যার মাধ্যমে প্রোটোজোয়ান পরজীবী হোস্ট আক্রমণকে প্রতিরোধ করে এবং সংক্রমণকে স্থায়ী করে।সম্প্রতি, একটি ক্রমবর্ধমান ধারণা রয়েছে যে প্রোটোজোয়ান-সম্পর্কিত মাইক্রোভেসিকেল এবং তাদের মাইক্রোআরএনএগুলি তাদের বেঁচে থাকার জন্য একটি অনুকূল পরিবেশ তৈরি করতে হোস্ট কোষের সাথে যোগাযোগ করে।অতএব, পরিবর্তিত এক্সোসোমাল এমআইআরএনএ এবং গ্লিওমা কোষের বিস্তারের মধ্যে সম্পর্ক আবিষ্কার করার জন্য আরও অধ্যয়ন প্রয়োজন।মাইক্রোআরএনএ পরিবর্তন (ক্লাস্টার জিন miR-30c-1, miR-125b-2, miR-23b-27b-24-1 এবং miR-17-92) টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত মানব ম্যাক্রোফেজে STAT3 প্রোমোটারের সাথে আবদ্ধ হয়, নিয়ন্ত্রিত হয় এবং বিরোধীকে প্ররোচিত করে। টক্সোপ্লাজমা গন্ডি সংক্রমণের প্রতিক্রিয়ায় অ্যাপোপটোসিস 29।টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ miR-17-5p এবং miR-106b-5p এর অভিব্যক্তি বাড়ায়, যা বেশ কয়েকটি হাইপারপ্রোলিফেরেটিভ রোগের সাথে যুক্ত।এই তথ্যগুলি পরামর্শ দেয় যে টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হোস্ট মাইআরএনএগুলি হোস্ট জৈবিক আচরণে পরজীবী বেঁচে থাকার এবং প্যাথোজেনেসিসের জন্য গুরুত্বপূর্ণ অণু।
পরিবর্তিত এমআইআরএনএগুলি ম্যালিগন্যান্ট কোষগুলির সূচনা এবং অগ্রগতির সময় বিভিন্ন ধরণের আচরণকে প্রভাবিত করতে পারে, যার মধ্যে গ্লিওমাস রয়েছে: বৃদ্ধি সংকেতগুলির স্বয়ংসম্পূর্ণতা, বৃদ্ধি-প্রতিরোধকারী সংকেতগুলির প্রতি সংবেদনশীলতা, অ্যাপোপটোসিস এড়ানো, সীমাহীন প্রতিলিপি সম্ভাবনা, অ্যাঞ্জিওজেনেসিস, আক্রমণ এবং মেটাস্ট্যাসিস, এবং ইনফ্ল্যাম।গ্লিওমাতে, পরিবর্তিত miRNA গুলিকে বেশ কয়েকটি এক্সপ্রেশন প্রোফাইলিং স্টাডিতে চিহ্নিত করা হয়েছে।
বর্তমান গবেষণায়, আমরা টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত হোস্ট কোষগুলিতে উচ্চ স্তরের miRNA-21 এক্সপ্রেশন নিশ্চিত করেছি।miR-21 কে গ্লিওমাস, 33 সহ কঠিন টিউমারগুলিতে সর্বাধিক ঘন ঘন অত্যধিক এক্সপ্রেসড মাইক্রোআরএনএ হিসাবে চিহ্নিত করা হয়েছে এবং এর অভিব্যক্তি গ্লিওমার গ্রেডের সাথে সম্পর্কযুক্ত।জমা হওয়া প্রমাণগুলি থেকে বোঝা যায় যে miR-21 হল একটি অভিনব অনকোজিন যা গ্লিওমা বৃদ্ধিতে একটি অ্যান্টি-অ্যাপোপ্টোটিক ফ্যাক্টর হিসাবে কাজ করে এবং মানুষের মস্তিষ্কের ক্ষতিকারক টিস্যু এবং প্লাজমাতে অত্যন্ত অত্যধিক প্রকাশ পায়।মজার বিষয় হল, গ্লিওমা কোষ এবং টিস্যুতে miR-21 নিষ্ক্রিয়তা ক্যাসপেস-নির্ভর অ্যাপোপটোসিসের কারণে কোষের বিস্তারকে বাধা দেয়।miR-21 পূর্বাভাসিত লক্ষ্যগুলির বায়োইনফরম্যাটিক বিশ্লেষণে অ্যাপোপ্টোসিস পথের সাথে যুক্ত একাধিক টিউমার দমনকারী জিন প্রকাশ করা হয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে প্রোগ্রামড সেল ডেথ 4 (PDCD4), ট্রপোমায়োসিন (TPM1), PTEN, এবং ফর্কহেড বক্স O1 (FoxO1), miR-2121 বাইন্ডিং সাইট সহ।.22.38.
FoxO1, ট্রান্সক্রিপশন ফ্যাক্টরগুলির মধ্যে একটি হিসাবে (FoxO), বিভিন্ন ধরণের মানুষের ক্যান্সারের বিকাশের সাথে জড়িত এবং টিউমার দমনকারী জিন যেমন p21, p27, Bim এবং FasL40 এর অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করতে পারে।FoxO1 কোষের বৃদ্ধি দমন করতে p27 এর মতো কোষ চক্র প্রতিরোধককে আবদ্ধ এবং সক্রিয় করতে পারে।অধিকন্তু, FoxO1 হল PI3K/Akt সিগন্যালিংয়ের একটি মূল প্রভাবক এবং p2742 ট্রান্সক্রিপশন সক্রিয় করার মাধ্যমে কোষ চক্রের অগ্রগতি এবং কোষের পার্থক্যের মতো অনেক জৈবিক প্রক্রিয়া নিয়ন্ত্রণ করে।
উপসংহারে, আমরা বিশ্বাস করি যে টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত মাইক্রোগ্লিয়া থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমাল miR-21 গ্লিওমা কোষের বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক হিসাবে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করতে পারে (চিত্র 7)।যাইহোক, এক্সোসোমাল miR-21, পরিবর্তিত টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ এবং গ্লিওমা বৃদ্ধির মধ্যে সরাসরি যোগসূত্র খুঁজে পেতে আরও অধ্যয়নের প্রয়োজন।এই ফলাফলগুলি টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ এবং গ্লিওমার ঘটনাগুলির মধ্যে সম্পর্ক অধ্যয়নের জন্য একটি সূচনা বিন্দু প্রদান করবে বলে আশা করা হচ্ছে।
গ্লিওমা (মস্তিষ্ক) কার্সিনোজেনেসিসের প্রক্রিয়াটির একটি পরিকল্পিত চিত্র এই গবেষণায় প্রস্তাব করা হয়েছে।লেখক PowerPoint 2019 (Microsoft, Redmond, WA) এ আঁকেন।
এই গবেষণায় সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রোটোকল, পশুদের ব্যবহার সহ, সিউল ন্যাশনাল ইউনিভার্সিটি অ্যানিমেল কেয়ার এবং ব্যবহারকারী কমিটির স্ট্যান্ডার্ড নৈতিক নির্দেশিকা অনুসারে ছিল এবং সিউল ন্যাশনাল ইউনিভার্সিটি স্কুল অফ মেডিসিনের প্রাতিষ্ঠানিক পর্যালোচনা বোর্ড দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল (IRB নম্বর SNU- 150715)।-2)।সমস্ত পরীক্ষামূলক পদ্ধতি ARRIVE সুপারিশ অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল।
BV2 মাউস মাইক্রোগ্লিয়া এবং U87 মানব গ্লিওমা কোষগুলি যথাক্রমে Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM; Welgene, Seoul, Korea) এবং Roswell Park Memorial Institute's Medium (RPMI; Welgene) তে সংষ্কৃত হয়েছে, প্রতিটিতে 10% ভ্রূণ বোভাইন সিরাম, m-4 মি. গ্লুটামিন, 0.2 মিমি পেনিসিলিন এবং 0.05 মিমি স্ট্রেপ্টোমাইসিন।37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 5% CO2 সহ একটি ইনকিউবেটরে কোষগুলিকে সংষ্কৃত করা হয়েছিল।আরেকটি গ্লিওমা সেল লাইন, U118, U87 কোষের সাথে তুলনা করার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল।
T. gondii-সংক্রমিত RH এবং ME49 স্ট্রেন থেকে এক্সোসোমগুলিকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য, T. gondii tachyzoites (RH স্ট্রেন) 3-4 দিন আগে 6-সপ্তাহ বয়সী BALB/c ইঁদুরের পেটের গহ্বর থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল।Tachyzoites পিবিএস দিয়ে তিনবার ধৌত করা হয়েছিল এবং 40% পারকোলে সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা বিশুদ্ধ করা হয়েছিল (সিগমা-অলড্রিচ, সেন্ট লুইস, MO, USA)43।স্ট্রেন ME49-এর ট্যাকিজয়েটগুলি পেতে, BALB/c ইঁদুরগুলিকে 20 টি টিস্যু সিস্ট দিয়ে ইন্ট্রাপেরিটোনলি ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল এবং সংক্রমণের (PI) পরে 6-8 তম দিনে পেটের গহ্বর ধুয়ে সিস্টগুলিতে ট্যাকিজয়েট রূপান্তর সংগ্রহ করা হয়েছিল।পিবিএস দ্বারা সংক্রামিত ইঁদুর।100 μg/ml পেনিসিলিন (Gibco/BRL, Grand Island, NY, USA), 100 μg/ml স্ট্রেপ্টোমাইসিন (Gibco/BRL), এবং 5% ভ্রূণের বোভাইন সিরাম (লোনজা, ওয়াকারসভিল, MD) এর সাথে সম্পূরক কোষে ME49 ট্যাকিজয়েট জন্মেছিল। .., USA) 37 °C এবং 5% কার্বন ডাই অক্সাইডে।ভেরো কোষে চাষের পর, ME49 ট্যাকিজয়েটগুলিকে 25 গেজ সুই দিয়ে দুবার এবং তারপরে ধ্বংসাবশেষ এবং কোষগুলি অপসারণের জন্য 5 µm ফিল্টারের মাধ্যমে পাস করা হয়েছিল।ধোয়ার পরে, টাকাইজয়েটগুলি PBS44 এ পুনরায় সাসপেন্ড করা হয়েছিল।টক্সোপ্লাজমা গন্ডি স্ট্রেন ME49-এর টিস্যু সিস্টগুলি সংক্রামিত C57BL/6 ইঁদুরের মস্তিষ্ক থেকে বিচ্ছিন্ন সিস্টগুলির ইন্ট্রাপেরিটোনিয়াল ইনজেকশন দ্বারা রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল (ওরিয়েন্ট বায়ো অ্যানিমাল সেন্টার, সেওংনাম, কোরিয়া)।ME49-সংক্রমিত ইঁদুরের মস্তিষ্ক PI-এর 3 মাস পরে সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং সিস্টগুলিকে আলাদা করার জন্য একটি মাইক্রোস্কোপের নীচে কিমা করা হয়েছিল।সিউল ন্যাশনাল ইউনিভার্সিটি স্কুল অফ মেডিসিনে সংক্রামিত ইঁদুরগুলিকে বিশেষ প্যাথোজেন-মুক্ত অবস্থার (এসপিএফ) অধীনে রাখা হয়েছিল।
মোট আরএনএ বিভি 2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোম, বিভি 2 কোষ এবং টিস্যু থেকে বের করা হয়েছিল miRNeasy মিনি কিট (কিয়াজেন, হিলডেন, জার্মানি) ব্যবহার করে প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে, যার মধ্যে ইলুশন ধাপের জন্য ইনকিউবেশন সময় অন্তর্ভুক্ত ছিল।RNA ঘনত্ব একটি NanoDrop 2000 স্পেকট্রোফোটোমিটারে নির্ধারিত হয়েছিল।একটি Agilent 2100 bioanalyzer (Agilent Technologies, Amstelveen, Netherlands) ব্যবহার করে RNA মাইক্রোয়ারের গুণমান মূল্যায়ন করা হয়েছিল।
10% এক্সোসোম-দরিদ্র FBS সহ DMEM 100,000g এ 4°C তাপমাত্রায় 16 ঘন্টার জন্য আল্ট্রাসেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং 0.22 µm ফিল্টার (Nalgene, Rochester, NY, USA) এর মাধ্যমে ফিল্টার করা হয়েছিল।BV2 কোষ, 5 × 105, DMEM-এ 10% এক্সোসোম-ক্ষয়প্রাপ্ত FBS এবং 1% অ্যান্টিবায়োটিক 37°C এবং 5% CO2 ধারণ করা হয়েছিল।ইনকিউবেশনের 24 ঘন্টা পরে, স্ট্রেন RH বা ME49 (MOI = 10) এর ট্যাকিজয়েটগুলি কোষে যুক্ত করা হয়েছিল এবং অ-আক্রমণকারী পরজীবীগুলি এক ঘন্টার মধ্যে সরিয়ে দেওয়া হয়েছিল এবং DMEM দিয়ে পুনরায় পূরণ করা হয়েছিল।BV2 কোষ থেকে এক্সোসোমগুলি পরিবর্তিত ডিফারেনশিয়াল সেন্ট্রিফিউগেশন দ্বারা বিচ্ছিন্ন করা হয়েছিল, যা সর্বাধিক ব্যবহৃত পদ্ধতি।আরএনএ বা প্রোটিন বিশ্লেষণের জন্য 300 μl পিবিএস-এ এক্সোসোম পেলেট পুনরায় চালু করুন।বিসিএ প্রোটিন অ্যাস কিট (পিয়ার্স, রকফোর্ড, আইএল, ইউএসএ) এবং একটি ন্যানোড্রপ 2000 স্পেকট্রোফোটোমিটার ব্যবহার করে বিচ্ছিন্ন এক্সোসোমের ঘনত্ব নির্ধারণ করা হয়েছিল।
BV2 কোষ বা বিভি2 থেকে প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলিকে PRO-PREP™ প্রোটিন নিষ্কাশন দ্রবণে (iNtRon বায়োটেকনোলজি, Seongnam, Korea) lysed করা হয়েছিল এবং প্রোটিনগুলি Coomassie ব্রিলিয়ান্ট ব্লু স্টেনড 10% SDS polyacrylamide জেলগুলিতে লোড করা হয়েছিল৷এছাড়াও, প্রোটিনগুলি 2 ঘন্টার জন্য পিভিডিএফ ঝিল্লিতে স্থানান্তরিত হয়েছিল।অ্যালিক্স অ্যান্টিবডি (সেল সিগন্যালিং টেকনোলজি, বেভারলি, এমএ, ইউএসএ) এক্সোসোমাল মার্কার হিসাবে ওয়েস্টার্ন ব্লটগুলিকে বৈধ করা হয়েছিল।এইচআরপি-সংযুক্ত ছাগল অ্যান্টি-মাউস আইজিজি (এইচ + এল) (বেথাইল ল্যাবরেটরিজ, মন্টগোমারি, টিএক্স, ইউএসএ) এবং একটি LAS-1000 প্লাস লুমিনেসেন্ট ইমেজ বিশ্লেষক (ফুজি ফটোগ্রাফিক ফিল্ম, টোকিও, জাপান) একটি গৌণ অ্যান্টিবডি হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।.এক্সোসোমের আকার এবং রূপবিদ্যা অধ্যয়নের জন্য ট্রান্সমিশন ইলেক্ট্রন মাইক্রোস্কোপি করা হয়েছিল।BV2 কোষ (6.40 µg/µl) থেকে বিচ্ছিন্ন এক্সোসোমগুলি কার্বন-লেপা জালগুলিতে প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং 1 মিনিটের জন্য 2% ইউরানাইল অ্যাসিটেট দিয়ে নেতিবাচকভাবে দাগ দেওয়া হয়েছিল।প্রস্তুত নমুনাগুলি একটি ES1000W Erlangshen CCD ক্যামেরা (Gatan, Pleasanton, CA, USA) দিয়ে সজ্জিত একটি JEOL 1200-EX II (টোকিও, জাপান) ব্যবহার করে 80 kV এর ত্বরিত ভোল্টেজে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
BV2-প্রাপ্ত এক্সোসোমগুলি PKH26 রেড ফ্লুরোসেন্ট লিঙ্কার কিট (সিগমা-অলড্রিচ, সেন্ট লুইস, MO, USA) ব্যবহার করে ঘরের তাপমাত্রায় 15 মিনিটের জন্য দাগ দেওয়া হয়েছিল।U87 কোষ, 2×105, PKH26-লেবেলযুক্ত এক্সোসোম (লাল) বা নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসাবে কোনও এক্সোসোম নেই, একটি 5% CO2 ইনকিউবেটরে 24 ঘন্টার জন্য 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ইনকিউবেট করা হয়েছিল।U87 কোষের নিউক্লিয়াসকে DAPI (নীল) দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল, U87 কোষগুলিকে 4% প্যারাফর্মালডিহাইডে 15 মিনিটের জন্য 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে স্থির করা হয়েছিল এবং তারপরে একটি Leica TCS SP8 STED CW কনফোকাল মাইক্রোস্কোপ সিস্টেমে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল (লাইকা মাইক্রোসিস্টেম, ম্যানহাইম, জার্মানি)।পর্যবেক্ষণযোগ্য
মির-এক্স সিআরএনএ প্রথম স্ট্র্যান্ড সংশ্লেষণ এবং এসওয়াইবিআর কিউআরটি-পিসিআর কিট (টাকারা বায়ো ইনক।, শিগা, জাপান) ব্যবহার করে সিআরএনএ থেকে সিডিএনএ সংশ্লেষিত হয়েছিল।রিয়েল টাইম কোয়ান্টিটেটিভ পিসিআর আইকিউ 5 রিয়েল টাইম পিসিআর ডিটেকশন সিস্টেম (বায়ো-র্যাড, হারকিউলিস, সিএ, ইউএসএ) ব্যবহার করে প্রাইমার এবং টেমপ্লেটগুলি এসওয়াইবিআর প্রিমিক্সের সাথে মিশ্রিত করা হয়েছিল।15 সেকেন্ডের জন্য 95 ডিগ্রি সেলসিয়াসে ডিনাচুরেশনের 40টি চক্রের জন্য এবং 60 সেকেন্ডের জন্য 60 ডিগ্রি সেলসিয়াসে অ্যানিলিং করার জন্য ডিএনএ প্রশস্ত করা হয়েছিল।প্রতিটি পিসিআর প্রতিক্রিয়া থেকে তথ্য বিশ্লেষণ করা হয়েছিল iQ™5 অপটিক্যাল সিস্টেম সফ্টওয়্যার (বায়ো-র্যাড) এর ডেটা বিশ্লেষণ মডিউল ব্যবহার করে।নির্বাচিত টার্গেট জিন এবং β-actin/siRNA (এবং U6) এর মধ্যে জিনের অভিব্যক্তিতে আপেক্ষিক পরিবর্তনগুলি স্ট্যান্ডার্ড কার্ভ পদ্ধতি ব্যবহার করে গণনা করা হয়েছিল।ব্যবহৃত প্রাইমার ক্রমগুলি সারণি 1 এ দেখানো হয়েছে।
3 x 104 U87 গ্লিওমা কোষগুলিকে 96-ওয়েল প্লেটে বীজ দেওয়া হয়েছিল এবং BV2 (50 μg/mL) থেকে প্রাপ্ত টক্সোপ্লাজমা-সংক্রমিত এক্সোসোম বা BV2 (50 μg/mL) থেকে প্রাপ্ত ননপালস এক্সোসোমগুলির সাথে 12, 18 এবং 18 ঘন্টার নিয়ন্ত্রণ হিসাবে মিশ্রিত করা হয়েছিল। .সেল কাউন্টিং কিট -8 (ডোজিন্দো, কুমামোটো, জাপান) (পরিপূরক চিত্র S1-S3) 46 ব্যবহার করে কোষের বিস্তারের হার নির্ধারণ করা হয়েছিল।
5-সপ্তাহ বয়সী মহিলা BALB/c নগ্ন ইঁদুরগুলি ওরিয়েন্ট বায়ো (সিওংনাম-সি, দক্ষিণ কোরিয়া) থেকে কেনা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রা (22 ± 2 ডিগ্রি সেলসিয়াস) এবং আর্দ্রতা (45 ± 15 ডিগ্রি সেলসিয়াস) এ পৃথকভাবে জীবাণুমুক্ত খাঁচায় রাখা হয়েছিল।%) ঘরের তাপমাত্রায় (22±2°C) এবং আর্দ্রতা (45±15%)।এসপিএফ (সিউল ন্যাশনাল ইউনিভার্সিটি স্কুল অফ মেডিসিন অ্যানিমাল সেন্টার) এর অধীনে একটি 12-ঘন্টা আলোচক্র এবং 12-ঘন্টা অন্ধকার চক্র সঞ্চালিত হয়েছিল।ইঁদুরগুলিকে এলোমেলোভাবে 5টি ইঁদুরের তিনটি গ্রুপে বিভক্ত করা হয়েছিল এবং সমস্ত গ্রুপকে 400 মিলি পিবিএস সহ 1 x 107 U87 গ্লিওমা কোষ এবং বৃদ্ধির ফ্যাক্টর হ্রাস করা BD Matrigel™ (BD Science, Miami, FL, USA) সহ সাবকুটেনিয়াস ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।টিউমার ইনজেকশনের ছয় দিন পরে, BV2 কোষ থেকে প্রাপ্ত 200 মিলিগ্রাম এক্সোসোম (টক্সোপ্লাজমা সংক্রমণ সহ/বিহীন) টিউমার সাইটে ইনজেকশন দেওয়া হয়েছিল।টিউমার সংক্রমণের বাইশ দিন পর, প্রতিটি গ্রুপের ইঁদুরের টিউমারের আকার একটি ক্যালিপার দিয়ে সপ্তাহে তিনবার পরিমাপ করা হয়েছিল এবং টিউমারের পরিমাণ সূত্র দ্বারা গণনা করা হয়েছিল: 0.5×(প্রস্থ)×2×দৈর্ঘ্য।
miRCURYTM LNA miRNA অ্যারে ব্যবহার করে MicroRNA এক্সপ্রেশন বিশ্লেষণ, 7ম প্রজন্মের আছে, mmu এবং rno অ্যারে (EXIQON, Vedbaek, ডেনমার্ক) 3100টি মানুষ, মাউস এবং ইঁদুর miRNA ক্যাপচার প্রোবের মধ্যে 1119টি ভাল বৈশিষ্ট্যযুক্ত ইঁদুরকে কভার করে।এই প্রক্রিয়া চলাকালীন, বাছুরের অন্ত্রের ক্ষারীয় ফসফেটেস দিয়ে চিকিত্সার মাধ্যমে 5′-ফসফেট থেকে মোট RNA এর 250 থেকে 1000 ng অপসারণ করা হয়েছিল এবং তারপরে Hy3 সবুজ ফ্লুরোসেন্ট ডাই দিয়ে লেবেল করা হয়েছিল।তারপরে লেবেলযুক্ত নমুনাগুলিকে হাইব্রিডাইজেশন চেম্বার কিট (এজিলেন্ট টেকনোলজিস, সান্তা ক্লারা, সিএ, ইউএসএ) এবং একটি হাইব্রিডাইজেশন স্লাইড কিট (এজিলেন্ট টেকনোলজিস) ব্যবহার করে মাইক্রোয়ারে স্লাইডগুলি লোড করে হাইব্রিডাইজ করা হয়েছিল।হাইব্রিডাইজেশন 56 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 16 ঘন্টার জন্য করা হয়েছিল, তারপরে প্রস্তুতকারকের সুপারিশ অনুসারে মাইক্রোয়ারেগুলি ধুয়ে ফেলা হয়েছিল।প্রক্রিয়াকৃত মাইক্রোয়ারে স্লাইডগুলি তখন একটি Agilent G2565CA মাইক্রোয়ারে স্ক্যানার সিস্টেম (এজিলেন্ট টেকনোলজিস) ব্যবহার করে স্ক্যান করা হয়েছিল।স্ক্যান করা ছবিগুলি অ্যাজিলেন্ট ফিচার এক্সট্রাকশন সফ্টওয়্যার সংস্করণ 10.7.3.1 (এজিলেন্ট টেকনোলজিস) ব্যবহার করে আমদানি করা হয়েছিল এবং পরিবর্তিত এক্সিকন প্রোটোকলের সংশ্লিষ্ট GAL ফাইল ব্যবহার করে প্রতিটি ছবির ফ্লুরোসেন্সের তীব্রতা পরিমাপ করা হয়েছিল।বর্তমান অধ্যয়নের জন্য মাইক্রোয়ারে ডেটা জিইও ডাটাবেসে অ্যাকসেশান নম্বর GPL32397-এর অধীনে জমা করা হয়েছে।
টক্সোপ্লাজমা দ্বারা সংক্রামিত RH বা ME49 স্ট্রেনের মাইক্রোগ্লিয়াতে পরিপক্ক এক্সোসোমাল miRNA এর এক্সপ্রেশন প্রোফাইলগুলি বিভিন্ন নেটওয়ার্ক সরঞ্জাম ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।টিউমারের বিকাশের সাথে যুক্ত miRNA গুলিকে miRWalk2.0 (http://mirwalk.umm.uni-heidelberg.de) ব্যবহার করে চিহ্নিত করা হয়েছিল এবং 8.0-এর বেশি স্বাভাবিক সংকেত তীব্রতা (log2) দিয়ে ফিল্টার করা হয়েছিল।miRNA গুলির মধ্যে, T. gondii দ্বারা সংক্রামিত RH বা ME49 স্ট্রেনের দ্বারা পরিবর্তিত miRNA-এর ফিল্টার বিশ্লেষণের মাধ্যমে ভিন্নভাবে প্রকাশিত miRNAগুলি 1.5-গুণেরও বেশি পরিবর্তিত হতে দেখা গেছে।
Lipofectamine 2000 (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) ব্যবহার করে Opti-MEM (Gibco, Carlsbad, CA, USA) তে ছয়-ওয়েল প্লেটে (3 x 105 কোষ/কূপ) কোষগুলিকে বীজ দেওয়া হয়েছিল।স্থানান্তরিত কোষগুলিকে 6 ঘন্টার জন্য সংষ্কৃত করা হয়েছিল এবং তারপরে মাধ্যমটিকে তাজা সম্পূর্ণ মিডিয়ামে পরিবর্তন করা হয়েছিল।স্থানান্তরের 24 ঘন্টা পরে কোষগুলি কাটা হয়েছিল।
পরিসংখ্যানগত বিশ্লেষণ মূলত এক্সেল সফ্টওয়্যার (মাইক্রোসফ্ট, ওয়াশিংটন, ডিসি, ইউএসএ) সহ শিক্ষার্থীদের টি-টেস্ট ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল।পরীক্ষামূলক প্রাণী বিশ্লেষণের জন্য, প্রিজম 3.0 সফ্টওয়্যার (গ্রাফপ্যাড সফ্টওয়্যার, লা জোলা, CA, USA) ব্যবহার করে একটি দ্বি-মুখী ANOVA সঞ্চালিত হয়েছিল। পি-মান <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল। পি-মান <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ হিসাবে বিবেচিত হয়েছিল। Значения P <0,05 считались статистически значимыми. পি মান <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল। পি 值< 0.05 被认为具有统计学意义। পি 值< 0.05 Значения P <0,05 считались статистически значимыми. পি মান <0.05 পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ বলে বিবেচিত হয়েছিল।
এই গবেষণায় ব্যবহৃত সমস্ত পরীক্ষামূলক প্রোটোকল সিউল ন্যাশনাল ইউনিভার্সিটি স্কুল অফ মেডিসিনের ইনস্টিটিউশনাল রিভিউ বোর্ড (IRB নম্বর SNU-150715-2) দ্বারা অনুমোদিত হয়েছিল।
The data used in this study are available upon reasonable request from the first author (BK Jung; mulddang@snu.ac.kr). And the microarray data for the current study is deposited in the GEO database under registration number GPL32397.
Furley, J. et al.2018 সালে আনুমানিক বিশ্বব্যাপী ক্যান্সারের ঘটনা এবং মৃত্যুর হার: গ্লোবোকান উত্স এবং পদ্ধতি।ব্যাখ্যা.জে. রাক 144, 1941-1953 (2019)।
রাশেদ, এস., রেহমান, কে. এবং আকাশ, এমএস মস্তিষ্কের টিউমারের ঝুঁকির কারণ এবং তাদের থেরাপিউটিক হস্তক্ষেপের অন্তর্দৃষ্টি। রাশেদ, এস., রেহমান, কে. এবং আকাশ, এমএস মস্তিষ্কের টিউমারের ঝুঁকির কারণ এবং তাদের থেরাপিউটিক হস্তক্ষেপের অন্তর্দৃষ্টি।রশিদ, এস., রেহমান, কে. এবং আকাশ, এমএস ব্রেন টিউমার এবং প্রধান থেরাপিউটিক হস্তক্ষেপের ঝুঁকির কারণগুলির একটি পর্যালোচনা। রাশেদ, এস., রেহমান, কে. ও আকাশ, এমএস 深入了解脑肿瘤的危险因素及其治疗干预措施। রাশেদ, এস., রেহমান, কে. এবং আকাশ, এমএস ব্রেন টিউমার ঝুঁকির কারণ এবং থেরাপিউটিক হস্তক্ষেপের গভীর উপলব্ধি।রশিদ, এস., রেহমান, কে. এবং আকাশ, এমএস ব্রেন টিউমার এবং প্রধান থেরাপিউটিক হস্তক্ষেপের ঝুঁকির কারণগুলির একটি পর্যালোচনা।জৈবচিকিৎসা বিজ্ঞান.ফার্মাসিস্ট।143, 112119 (2021)।
Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. মানুষের অরোডিজেস্টিভ এবং মহিলা যৌনাঙ্গের ট্র্যাক্ট ক্যান্সারে ব্যাকটেরিয়া-ভাইরাল মিথস্ক্রিয়া: মহামারীবিদ্যা এবং পরীক্ষাগার প্রমাণের সারাংশ। Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. মানুষের অরোডিজেস্টিভ এবং মহিলা যৌনাঙ্গের ট্র্যাক্ট ক্যান্সারে ব্যাকটেরিয়া-ভাইরাল মিথস্ক্রিয়া: মহামারীবিদ্যা এবং পরীক্ষাগার প্রমাণের সারাংশ।Kato I., Zhang J. এবং Sun J. মানুষের গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ট্র্যাক্ট এবং মহিলা যৌনাঙ্গের ট্র্যাক্টের ক্যান্সারে ব্যাকটেরিয়া-ভাইরাল মিথস্ক্রিয়া: মহামারী ও পরীক্ষাগার ডেটার সারাংশ। Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. 人类口腔消化道癌和女性生殖道癌中的细菌-病毒相中的细菌-病毒相互央咦茵黀夯夯夯弚滀口腔消化道癌 Kato, I., Zhang, J. & Sun, J. মানুষের মৌখিক গহ্বরের হজম এবং মহিলা প্রজনন ট্র্যাক্টে ব্যাকটেরিও-ভাইরাল মিথস্ক্রিয়া: জনপ্রিয় রোগ বিজ্ঞান এবং পরীক্ষাগার প্রমাণের সারাংশ।Kato I., Zhang J. এবং Sun J. মানুষের গ্যাস্ট্রোইনটেস্টাইনাল ক্যান্সার এবং মহিলা যৌনাঙ্গের ক্যান্সারে ব্যাকটেরিয়া-ভাইরাল মিথস্ক্রিয়া: মহামারী ও পরীক্ষাগার ডেটার সারাংশ।কর্কট 14, 425 (2022)।
ম্যাগন, কেএল এবং প্যারিশ, জেএল সংক্রমণ থেকে ক্যান্সার পর্যন্ত: কীভাবে ডিএনএ টিউমার ভাইরাস হোস্ট কোষের কেন্দ্রীয় কার্বন এবং লিপিড বিপাককে পরিবর্তন করে। ম্যাগন, কেএল এবং প্যারিশ, জেএল সংক্রমণ থেকে ক্যান্সার পর্যন্ত: কীভাবে ডিএনএ টিউমার ভাইরাস হোস্ট কোষের কেন্দ্রীয় কার্বন এবং লিপিড বিপাককে পরিবর্তন করে।মাহন, কেএল এবং প্যারিশ, জেএল ফায়ার ইনফেকশন থেকে ক্যান্সার: কীভাবে ডিএনএ-ভিত্তিক টিউমার ভাইরাস হোস্ট সেল কেন্দ্রীয় কার্বন এবং লিপিড বিপাককে পরিবর্তন করে। ম্যাগন, কেএল এবং প্যারিশ, জেএল 从感染到癌症：DNA 肿瘤病毒如何改变宿主细胞的中心碳和脂质代谢। ম্যাগন, কেএল এবং প্যারিশ, জেএল সংক্রমণ থেকে ক্যান্সার পর্যন্ত: কীভাবে ডিএনএ টিউমার ভাইরাস হোস্ট কোষের কেন্দ্রীয় কার্বন এবং লিপিড বিপাককে পরিবর্তন করে।মাহন, কেএল এবং প্যারিশ, জেএল ক্যান্সারের সংক্রমণে আগুন দেয়: কীভাবে ডিএনএ টিউমার ভাইরাস হোস্ট কোষে কেন্দ্রীয় কার্বন এবং লিপিড বিপাককে পরিবর্তন করে।ওপেন বায়োলজি।11, 210004 (2021)।
Correia da Costa, JM et al.সিস্টোসোম এবং লিভার ফ্লুকস এবং হেলমিন্থ-সম্পর্কিত ক্যান্সারের ক্যাটেকোল ইস্ট্রোজেন।সামনেভিতরে গরম।5, 444 (2014)।